田鼠巴贝斯虫过氧化物氧化还原酶Prx1氨基酸突变对其功能的影响
发布时间：2021-05-14 07:18
巴贝斯虫是一种寄生于哺乳动物红细胞的顶复门原虫,病原体主要通过蜱叮咬、输血、器官移植和胎盘垂直传播。田鼠巴贝斯虫是人病兽共患的巴贝斯虫病,感染后导致红细胞溶解,黄疸,溶血性贫血,缓解性发热和肾功能不全,死亡率为10%。巴贝斯虫病被认为是一种新发的威胁全球健康的疾病,但缺少高效方便的治疗药物,因此,需要研究药物及其靶标分子。巴贝斯虫生活在富含氧的红细胞中,产生大量的活性氧（ROS）,会破坏生物大分子,为了抵消这种影响,寄生虫自身存在一系列的抗氧化分子,如硫氧还蛋白,过氧化物氧化还原酶和超氧化物歧化酶等。为了研究抗氧化分子的药物靶标潜力,本实验室前期已经克隆了过氧化物氧化还原酶prx1全长基因序列,并对其进行了重组表达,获得了纯化的重组蛋白,验证了其基本功能。本项研究将对该分子的关键活性位点进行突变,研究其结构与功能的关系。1.应用q-PCR方法检测小鼠感染后不同天数的巴贝斯虫的prx1表达水平,发现prx1表达水平在感染的2-7d是缓慢增加的,第8d达到峰值后又迅速下降。表明该分子与感染过程密切相关。2.根据生物信息学分析,确定了prx1第50位半胱氨酸、第170位半胱氨酸的关键作用,设...
【文章来源】：上海师范大学上海市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号表
第1章 文献综述
1.1 Prxs的分类和结构
1.1.1 Prxs的分类
1.1.2 Prxs的结构
1.2 Prxs的功能
1.2.1 硫氧还蛋白依赖性过氧化物酶活性
1.2.2 分子伴侣活性
1.2.3 Prxs作为过氧化物的传感器和生物功能的调节剂
1.2.4 Prxs作为炎症反应的调节剂起作用
1.3 各种寄生虫Prxs的研究
1.3.1 疟原虫
1.3.2 弓形虫
1.3.3 血吸虫
1.3.4 巴贝斯虫
1.3.5 蜱
1.3.6 大片吸虫
1.4 Prx相关抑制剂
1.4.1 过氧化物酶功能抑制剂
1.4.2 分子伴侣活性抑制剂
1.5 小结
第2章 q-PCR检测prx1 的相对表达水平
2.1 引言
2.2 实验材料
2.3 实验方法
2.3.1 田鼠巴贝斯虫的冻存与传代
2.3.2 虫体的复苏与传代
2.3.3 血涂片的制备
2.3.4 q-PCR
2.4 实验结果
2.5 讨论
第3章 田鼠巴贝斯虫Prxs氨基酸定点突变的质粒构建
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.3 实验方法
3.4 实验结果
3.4.1 Prx1 突变位点：cys50,cys170
3.4.2 野生型、C50S、C170S、C50SC170S Prx1 基因序列比对
3.4.3 野生型、C50S、C170S、C50SC170S Prx1 氨基酸序列比对
3.5 讨论
第4章 田鼠巴贝斯虫Prxs氨基酸C50S、C170S、C50SC170S蛋白的表达及鉴定
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.3 实验方法
4.3.1 Wild/pet-30a、C50S/pet-30a、 C170S/pet-30a、 C50SC170S/pet-30a提取
4.3.2 重组蛋白Wild、C50S、C170S、C50SC170S的表达及鉴定
4.4 实验结果
4.5 讨论
第5章 田鼠巴贝斯虫Prxs氨基酸突变对抗氧化功能的影响
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验仪器
5.2.2 实验试剂
5.3 实验方法
5.3.1 硫氰酸铁法测Prx1 催化H2O2 实验
5.3.2 质粒保护实验
5.3.3 抗氧化活性测定
5.4 实验结果
5.4.1 硫酸氢铁法催化过氧化氢
5.4.2 MFO实验
5.5 讨论
第6章 田鼠巴贝斯虫Prxs分子伴侣功能
6.1 引言
6.2 实验材料
6.3 实验方法
6.3.1 Prx1的DNA分子伴侣功能
6.3.2 Prx1 的蛋白分子伴侣功能
6.4 实验结果
6.5 讨论
全文总结
参考文献
作者简介
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
本文编号：3185232
【文章来源】：上海师范大学上海市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
主要符号表
第1章 文献综述
1.1 Prxs的分类和结构
1.1.1 Prxs的分类
1.1.2 Prxs的结构
1.2 Prxs的功能
1.2.1 硫氧还蛋白依赖性过氧化物酶活性
1.2.2 分子伴侣活性
1.2.3 Prxs作为过氧化物的传感器和生物功能的调节剂
1.2.4 Prxs作为炎症反应的调节剂起作用
1.3 各种寄生虫Prxs的研究
1.3.1 疟原虫
1.3.2 弓形虫
1.3.3 血吸虫
1.3.4 巴贝斯虫
1.3.5 蜱
1.3.6 大片吸虫
1.4 Prx相关抑制剂
1.4.1 过氧化物酶功能抑制剂
1.4.2 分子伴侣活性抑制剂
1.5 小结
第2章 q-PCR检测prx1 的相对表达水平
2.1 引言
2.2 实验材料
2.3 实验方法
2.3.1 田鼠巴贝斯虫的冻存与传代
2.3.2 虫体的复苏与传代
2.3.3 血涂片的制备
2.3.4 q-PCR
2.4 实验结果
2.5 讨论
第3章 田鼠巴贝斯虫Prxs氨基酸定点突变的质粒构建
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 实验仪器
3.2.2 实验试剂
3.3 实验方法
3.4 实验结果
3.4.1 Prx1 突变位点：cys50,cys170
3.4.2 野生型、C50S、C170S、C50SC170S Prx1 基因序列比对
3.4.3 野生型、C50S、C170S、C50SC170S Prx1 氨基酸序列比对
3.5 讨论
第4章 田鼠巴贝斯虫Prxs氨基酸C50S、C170S、C50SC170S蛋白的表达及鉴定
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 实验仪器
4.2.2 实验试剂
4.3 实验方法
4.3.1 Wild/pet-30a、C50S/pet-30a、 C170S/pet-30a、 C50SC170S/pet-30a提取
4.3.2 重组蛋白Wild、C50S、C170S、C50SC170S的表达及鉴定
4.4 实验结果
4.5 讨论
第5章 田鼠巴贝斯虫Prxs氨基酸突变对抗氧化功能的影响
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 实验仪器
5.2.2 实验试剂
5.3 实验方法
5.3.1 硫氰酸铁法测Prx1 催化H2O2 实验
5.3.2 质粒保护实验
5.3.3 抗氧化活性测定
5.4 实验结果
5.4.1 硫酸氢铁法催化过氧化氢
5.4.2 MFO实验
5.5 讨论
第6章 田鼠巴贝斯虫Prxs分子伴侣功能
6.1 引言
6.2 实验材料
6.3 实验方法
6.3.1 Prx1的DNA分子伴侣功能
6.3.2 Prx1 的蛋白分子伴侣功能
6.4 实验结果
6.5 讨论
全文总结
参考文献
作者简介
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
本文编号：3185232
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