鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增（LAMP）与SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
发布时间：2021-05-14 16:23
鼻气管鸟疫杆菌（Ornithobacteriumr hinotrotracheale, ORT）可引起禽类以生长障碍、死亡率增加为特征的鼻气管鸟疫杆菌病，菌体大小约为0.2μm×0.6～5.0μm，隶属于rRNA第5超科。鼻气管鸟疫杆菌是一种G-小短杆菌，具有多形性和不运动的特性，在普通培养基上基本不生长，在血液琼脂上生长缓慢，5%-10%CO2条件下，于5%绵羊血液琼脂37℃恒温培养24h-48h后，可以观察到针尖大小，具有不溶血特性的圆形灰白色或浅红色的奶酪样菌落，并可以产生一种似酪酸样的气味。感染ORT的禽类主要表现为呼吸异常、生长缓慢、死亡率高等特征，其剖检变化以严重的单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎、坏死性肺炎、支气管炎、气囊炎等为特征。1981年，鼻气管鸟疫杆菌首次被德国学者分离到，直至1994年，该菌才被正式称作ORT。1986年以色列首次报道该国存在ORT，随后荷兰、比利时、美国、德国、法国、加拿大和日本相继报道检测到ORT抗体或分离到ORT。迄今为止，鼻气管鸟疫杆菌病流行于许多发达国家，如欧洲、非洲及南非的国家，并有继续上升趋势，严重的威胁到养禽业的发展。国内陈小玲等研究...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鼻气管鸟疫杆菌的研究进展
1.1.1 ORT 的病原学研究
1.1.2 ORT 的流行病学
1.1.3 ORT 感染的诊断
1.1.4 ORT 的分离鉴定
1.1.5 防治措施
1.2 LAMP 的研究进展
1.2.1 LAMP 原理
1.2.2 LAMP 检测方法的引物设计
1.2.3 LAMP 检测方法的应用
1.3 实时荧光定量 PCR 的研究进展
1.3.1 实时荧光定量 PCR 的基本原理
1.3.2 实时荧光定量 PCR 的检测模式
1.3.3 荧光域值（THRESHOLD）与 CT 值
1.3.4 实时荧光定量 PCR 的应用
1.3.5 荧光定量 PCR 和常规 PCR 技术的区别
1.4 本课题研究的目的意义及内容
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 菌种及样品
2.1.2 主要试剂
2.1.3 仪器设备
2.2 方法
2.2.1 鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立与应用
2.2.2 鼻气管鸟疫杆菌 SYBR GREENⅠ荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
3 结果与分析
3.1 鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立与应用
3.1.1 优化的 LAMP 反应体系和反应条件
3.1.2 LAMP 试验结果的判定
3.1.3 LAMP 扩增产物的双酶切鉴定
3.1.4 LAMP 的特异性试验
3.1.5 LAMP 的敏感性试验
3.1.6 LAMP 的临床应用
3.2 鼻气管鸟疫杆菌 SYBR GREENⅠ荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
3.2.1 常规质粒 PCR 鉴定结果
3.2.2 荧光定量 PCR 反应条件的优化
3.2.3 荧光定量 PCR 标准曲线的建立
3.2.4 扩增产物的溶解曲线分析
3.2.5 敏感性试验结果
3.2.6 特异性试验结果
3.2.7 重复性试验结果
3.2.8 ORT 样本检测试验结果
4 讨论
4.1 鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立与应用
4.2 鼻气管鸟疫杆菌 SYBR GREENⅠ荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
5 结论
附录
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]副猪嗜血杆菌与猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒混合感染的诊断[J]. 刘志杰,周莉,曾智勇,李如举. 黑龙江畜牧兽医. 2013(03)
[2]豫南地区蛋鸡鼻气管鸟杆菌分离鉴定及药敏试验[J]. 刘锦妮. 畜牧与兽医. 2012(12)
[3]鼻气管鸟杆菌对SPF雏鸡的致病性[J]. 吴海洋,刁有祥,刘霞,杨建朋,肖坡. 中国兽医学报. 2012(08)
[4]家禽气囊炎及其防治[J]. 李建海. 家禽科学. 2012(08)
[5]禽鼻气管鸟杆菌病的防治[J]. 崔兆强,王照修,付文秀. 山东畜牧兽医. 2011(12)
[6]鸡鼻气管炎的防治措施[J]. 唐丽萍,林岚岚. 畜牧兽医科技信息. 2011(09)
[7]禽呼肠孤病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J]. 董嘉文,孙敏华,尚毅,胡奇林. 中国兽医学报. 2011(07)
[8]疑似鸡鼻气管鸟杆菌的病例诊断[J]. 祁国红. 北方牧业. 2011(10)
[9]顽固性支气管阻塞症的诊疗报告[J]. 向天龙. 今日畜牧兽医. 2011(04)
[10]产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌LAMP检测方法的建立[J]. 冯瑜菲,朱颖,刘文鑫,江馗语,何丽丽,关玮琨,胡文霞,师东方. 中国兽医科学. 2011(03)
博士论文
[1]鹿茸尖端组织的EST分析及其生长相关功能基因的表达[D]. 郝丽.东北林业大学 2010
硕士论文
[1]鸭瘟病毒SDWF株的分离鉴定及致病性研究[D]. 张坤.山东农业大学 2012
[2]禽网状内皮组织增生症病毒感染对SPF鸡主要免疫器官白细胞介素2产生的影响[D]. 李恩扩.山东农业大学 2012
[3]犬细小病毒LAMP检测方法建立及其串联表位卵黄抗体中和效力评价[D]. 关玮琨.东北农业大学 2012
[4]犬棘球绦虫粪LAMP检测方法的建立和应用[D]. 倪兴维.中国农业科学院 2012
[5]实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立及初步应用[D]. 荣蓉.北京协和医学院 2012
[6]犬瘟热病毒LAMP检测方法建立及其串联表位卵黄抗体中和效力初步研究[D]. 何丽丽.东北农业大学 2012
[7]深圳地区柯萨奇病毒A组16型的分子流行病学研究及RT-LAMP检测方法的建立[D]. 宗文萍.南方医科大学 2011
[8]鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及致病性研究[D]. 吴海洋.山东农业大学 2011
[9]种鸭生殖系统新城疫病毒检测及鸭新城疫病毒垂直感染动物试验[D]. 李建侠.山东农业大学 2011
[10]广西鸡鼻气管鸟杆菌的分离和鉴定及其PCR诊断方法的研究[D]. 杨柳.广西大学 2005
本文编号：3185961
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 鼻气管鸟疫杆菌的研究进展
1.1.1 ORT 的病原学研究
1.1.2 ORT 的流行病学
1.1.3 ORT 感染的诊断
1.1.4 ORT 的分离鉴定
1.1.5 防治措施
1.2 LAMP 的研究进展
1.2.1 LAMP 原理
1.2.2 LAMP 检测方法的引物设计
1.2.3 LAMP 检测方法的应用
1.3 实时荧光定量 PCR 的研究进展
1.3.1 实时荧光定量 PCR 的基本原理
1.3.2 实时荧光定量 PCR 的检测模式
1.3.3 荧光域值（THRESHOLD）与 CT 值
1.3.4 实时荧光定量 PCR 的应用
1.3.5 荧光定量 PCR 和常规 PCR 技术的区别
1.4 本课题研究的目的意义及内容
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 菌种及样品
2.1.2 主要试剂
2.1.3 仪器设备
2.2 方法
2.2.1 鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法的建立与应用
2.2.2 鼻气管鸟疫杆菌 SYBR GREENⅠ荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
3 结果与分析
3.1 鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立与应用
3.1.1 优化的 LAMP 反应体系和反应条件
3.1.2 LAMP 试验结果的判定
3.1.3 LAMP 扩增产物的双酶切鉴定
3.1.4 LAMP 的特异性试验
3.1.5 LAMP 的敏感性试验
3.1.6 LAMP 的临床应用
3.2 鼻气管鸟疫杆菌 SYBR GREENⅠ荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
3.2.1 常规质粒 PCR 鉴定结果
3.2.2 荧光定量 PCR 反应条件的优化
3.2.3 荧光定量 PCR 标准曲线的建立
3.2.4 扩增产物的溶解曲线分析
3.2.5 敏感性试验结果
3.2.6 特异性试验结果
3.2.7 重复性试验结果
3.2.8 ORT 样本检测试验结果
4 讨论
4.1 鼻气管鸟疫杆菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立与应用
4.2 鼻气管鸟疫杆菌 SYBR GREENⅠ荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用
5 结论
附录
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]副猪嗜血杆菌与猪伪狂犬病毒、猪乙型脑炎病毒混合感染的诊断[J]. 刘志杰,周莉,曾智勇,李如举. 黑龙江畜牧兽医. 2013(03)
[2]豫南地区蛋鸡鼻气管鸟杆菌分离鉴定及药敏试验[J]. 刘锦妮. 畜牧与兽医. 2012(12)
[3]鼻气管鸟杆菌对SPF雏鸡的致病性[J]. 吴海洋,刁有祥,刘霞,杨建朋,肖坡. 中国兽医学报. 2012(08)
[4]家禽气囊炎及其防治[J]. 李建海. 家禽科学. 2012(08)
[5]禽鼻气管鸟杆菌病的防治[J]. 崔兆强,王照修,付文秀. 山东畜牧兽医. 2011(12)
[6]鸡鼻气管炎的防治措施[J]. 唐丽萍,林岚岚. 畜牧兽医科技信息. 2011(09)
[7]禽呼肠孤病毒RT-LAMP快速检测方法的建立[J]. 董嘉文,孙敏华,尚毅,胡奇林. 中国兽医学报. 2011(07)
[8]疑似鸡鼻气管鸟杆菌的病例诊断[J]. 祁国红. 北方牧业. 2011(10)
[9]顽固性支气管阻塞症的诊疗报告[J]. 向天龙. 今日畜牧兽医. 2011(04)
[10]产志贺毒素Ⅱ型变异体大肠杆菌LAMP检测方法的建立[J]. 冯瑜菲,朱颖,刘文鑫,江馗语,何丽丽,关玮琨,胡文霞,师东方. 中国兽医科学. 2011(03)
博士论文
[1]鹿茸尖端组织的EST分析及其生长相关功能基因的表达[D]. 郝丽.东北林业大学 2010
硕士论文
[1]鸭瘟病毒SDWF株的分离鉴定及致病性研究[D]. 张坤.山东农业大学 2012
[2]禽网状内皮组织增生症病毒感染对SPF鸡主要免疫器官白细胞介素2产生的影响[D]. 李恩扩.山东农业大学 2012
[3]犬细小病毒LAMP检测方法建立及其串联表位卵黄抗体中和效力评价[D]. 关玮琨.东北农业大学 2012
[4]犬棘球绦虫粪LAMP检测方法的建立和应用[D]. 倪兴维.中国农业科学院 2012
[5]实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立及初步应用[D]. 荣蓉.北京协和医学院 2012
[6]犬瘟热病毒LAMP检测方法建立及其串联表位卵黄抗体中和效力初步研究[D]. 何丽丽.东北农业大学 2012
[7]深圳地区柯萨奇病毒A组16型的分子流行病学研究及RT-LAMP检测方法的建立[D]. 宗文萍.南方医科大学 2011
[8]鼻气管鸟杆菌的分离鉴定及致病性研究[D]. 吴海洋.山东农业大学 2011
[9]种鸭生殖系统新城疫病毒检测及鸭新城疫病毒垂直感染动物试验[D]. 李建侠.山东农业大学 2011
[10]广西鸡鼻气管鸟杆菌的分离和鉴定及其PCR诊断方法的研究[D]. 杨柳.广西大学 2005
本文编号：3185961
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3185961.html
