J亚群禽白血病病毒（ALV-J）劫持胶原三螺旋重复蛋白1（CTHRC1）促进其复制

发布时间：2021-05-14 19:50

　　J亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）是一种典型的致瘤性逆转录病毒,该病毒基因组主要编码三个基因,即病毒衣壳蛋白（gag）、聚合酶（pol）和囊膜蛋白（env）。ALV-J侵染宿主细胞时,首先吸附到细胞特异性受体进入细胞浆,ALV-J自身所携带的反转录酶介导病毒从基因组RNA逆转录成前体病毒DNA,然后整合到宿主细胞基因组中利用宿主RNA聚合酶转录生成新病毒RNA,并进一步翻译生成病毒的各种前体蛋白和以及装配病毒粒子的成熟蛋白质,最后通过出芽的方式释放到胞外。ALV-J从吸附到脱壳（出芽）需要经历了复杂的生理过程;同时,ALV-J和其他病毒一样,基因组结构比较简单,缺乏自身复制所需的完整酶系统,所以ALV-J在复制过程中需要劫持对自身有利的宿主蛋白,利用宿主蛋白的相关功能和特性来完成自身复制,但是,参与ALV-J复制的相关宿主蛋白至今鲜有报道。为了明确对ALV-J复制起关键作用的宿主蛋白,本研究通过蛋白质组学（Tandem mass tag,TMT）方法来筛选相关差异表达蛋白。首先对ALV-J感染的DF-1细胞和正常DF-1细胞... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1.前言
    1.1 禽白血病病毒概述
        1.1.1 ALV分类
        1.1.2 ALV-J病毒基因组结构
        1.1.3 ALV-J复制过程
    1.2 胶原三螺旋重复蛋白1(CTHRC1)概述
        1.2.1 CTHRC1 结构特征
        1.2.2 CTHRC1 生物学功能和表达调控
        1.2.3 CTHRC1 参与肿瘤的病理过程
    1.3 本研究的目的与意义
2.材料与方法
    2.1 主要试剂及耗材
    2.2 主要缓冲液
    2.3 试验地点
    2.4 实验设备
    2.5 细胞及毒株
        2.5.1 细胞的传代培养
        2.5.2 细胞的接毒
        2.5.3 ALV-J感染SPF鸡胚
    2.6 蛋白质组学
    2.7 CTHRC1 碱基序列的优化和CTHRC1 过表达载体的构建
    2.8 CTHRC1 shRNA的设计与构建
    2.9 质粒转染
    2.10 Real-time PCR/qPCR
        2.10.1 细胞总RNA的提取
        2.10.2 RNA逆转录为c DNA
        2.10.3 Real-time PCR
        2.10.4 ALV-J绝对荧光定量PCR体系的建立
    2.11 Western blot
        2.11.1 细胞裂解
        2.11.2 BCA法测定蛋白的浓度
        2.11.3 Western blot检测蛋白表达水平
    2.12 免疫组织化学
    2.13 激光共聚焦
    2.14 免疫共沉淀
    2.15 ELISA
    2.16 数据分析
3.结果与分析
    3.1 ALV-J gp85 基因的绝对荧光定量PCR体系的建立
    3.2 CTHRC1 密码子的优化及酶切和测序鉴定
    3.3 基于蛋白质组学分析,CTHRC1 高表达可能与ALV-J复制有关
    3.4 ALV-J 感染促进 CTHRC1 的表达
        3.4.1 在体外 ALV-J 激活 CTHRC1 的表达
        3.4.2 ALV-J感染促进体内CTHRC1 表达
    3.5 过表达CTHRC1 促进ALV-J复制
    3.6 敲低 CTHRC1 抑制 ALV-J 复制
    3.7 CTHRC1和ALV-J的 SU蛋白互作
4.讨论
5.结论
6.参考文献
7.致谢
8.攻读学位期间发表论文及专利情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]胶原三螺旋重复蛋白-1参与疾病作用研究进展[J]. 韩乐,张玲玲,魏伟.  中国药理学通报. 2017(07)
[2]CTHRC1与肿瘤关系的研究进展[J]. 王萍,房静远.  生命科学. 2010(08)
[3]肿瘤浸润转移分子机制的研究进展[J]. 黄海力,王孟薇.  生物技术通讯. 2006(01)



本文编号：3186229