羊口疮病毒ORF019、ORF020基因原核表达及ORF019蛋白多克隆抗体的制备

发布时间：2021-05-14 23:20

　　羊口疮又称羊传染性脓疱皮炎病（contagious ecthyma,CE）,它是由副痘病毒属成员羊口疮病毒（Orf virus,ORFV）感染引起的一种人畜共患病。人、绵羊和山羊可通过接触感染发生的急性传染性皮肤病,这种皮肤性痘病毒已经发展出一系列机制,逃避人和动物的宿主免疫系统的监控。研究发现ORFV ORF019、ORFV ORF020基因分别编码的蛋白与VACV（vaccinia virus）的E2L和E3L蛋白为直系同源物,其中E3L蛋白通过隔离dsRNA来抑制INF系统,而E2L存在于感染细胞的成熟病毒粒子中,对病毒粒子的转运起着至关重要的作用。但目前对ORFV ORF019和ORF020基因分别编码的E2L和E3L蛋白的功能研究较少。因此,通过对ORFV的ORF019和ORF020基因编码蛋白的表达研究可为羊口疮的免疫诊断和免疫预防提供科学依据。1.ORFV ORF019和ORF020克隆及同源性分析参考GenBank中登录的ORFV OV-SA00株的基因组序列（登录号:AY386264）,根据ORF019和ORF020基因序列,运用Oligo6.0生物信息学软件分别设计... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
外文缩略词表
第一部分 文献综述
    第一章 羊口疮研究进展
        1 羊口疮的流行病学与临床症状
        2 病原学特征
        3 ORFV的基因组学
        4 ORFV的致病机理
        5 ORFV的免疫逃避机制
        6 ORFV的检测与诊断方法
            6.1 电子显微镜观察
            6.2 组织病理学诊断
            6.3 病毒分离培养
            6.4 ELISA检测
            6.5 补体结合试验诊断
            6.6 免疫印迹方法诊断
            6.7 常规PCR检测
            6.8 Real-tine PCR检测
            6.9 环介导等温扩增技术
        7 羊口疮疫苗研究
        8 羊口疮的防治
        9 本研究的目的意义
第二部分 试验研究
    第二章 ORFV ORF019和ORF020 基因的克隆及同源性分析
        1 材料
            1.1 毒株、细胞和载体
            1.2 试剂
            1.3 仪器
        2 方法
            2.1 OT细胞的传代培养
            2.2 ORFV的传代培养
            2.3 ORFV ORF019和ORF020 基因克隆
            2.4 PCR扩增
            2.5 琼脂糖凝胶电泳
            2.6 PCR产物回收、纯化
            2.7 目的片段与表达载体pET32a(+)的连接
            2.8 连接产物的转化
            2.9 重组质粒的鉴定
            2.10 同源性分析
        3 结果
            3.1 ORFV/QH02/2010株ORF019和ORF020 基因PCR扩增结果
            3.2 ORFV/QH02/2010株ORF019和ORF020 基因重组质粒的鉴定
            3.3 同源性分析结果
        4 讨论
    第三章 ORFV E2L和 E3L蛋白的表达及E2L蛋白多克隆抗体的制备
        1 材料
            1.1 菌株与重组质粒
            1.2 实验动物
            1.3 试剂
            1.4 仪器
            1.5 主要试剂的配制
        2 方法
            2.1 重组质粒表达菌的转化
            2.2 重组菌的诱导表达
            2.3 诱导温度的优化
            2.4 目的蛋白的大量表达
            2.5 目的蛋白的纯化
            2.6 Western-blot检测
            2.7 免疫原的制备
            2.8 E2L多克隆抗体的制备
            2.9 E2L多克隆抗体效价的测定
        3 结果
            3.1 重组蛋白的表达与鉴定
            3.2 重组蛋白表达的适宜温度选择
            3.3 融合蛋白的可溶性分析
            3.4 重组蛋白的纯化
            3.5 重组蛋白的Western-blot分析
            3.6 ELISA法检测兔抗His-E2L多克隆抗体效价
            3.7 兔抗His-E2L多克隆抗体特异性鉴定
        4 讨论
    第四章 全文结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介



本文编号：3186511