牛羊猪犬种布鲁氏菌多重PCR方法的建立及试剂盒研制

发布时间：2021-05-16 11:45

　　布鲁氏菌病（brucellosis，简称布病）是由布鲁氏菌引起的一种人兽共患病。该病广泛分布于世界各地，有170多个国家存在人畜布病。2000年以后，我国人畜布病的发病率呈逐年上升的趋势，给人类健康和畜牧业发展带来了巨大的危害。布鲁氏菌属中的牛、羊、猪、犬种布鲁氏菌不但可以感染家畜，而且均可以感染人类，是危害最为严重的种型。我国人畜布病中多种型感染的现象较为常见。牧区牛羊的养殖量大，人畜布病的疫情尤为严重。猪布病引起的感染现象不如牛羊布病疫情严重，不过猪布病引起人感染的报道也不少。我国犬的饲养量巨大，犬感染布鲁氏菌已得到证实。由于犬与人的接触密切，犬布病对人类构成了潜在威胁。目前，我国现有的布病病原学诊断方法均不能有效地区别牛、羊、猪、犬种布鲁氏菌。因此，研究一种能同时检测牛、羊、猪、犬种布鲁氏菌的多重PCR方法并组装出试剂盒，对于布病的流行病学调查和防控均具有重要的意义。本研究首先对牛、羊、猪、犬种布鲁氏菌的基因序列进行了生物信息学分析，根据牛、羊种布鲁氏菌在ABC转运结合蛋白（BR0951-BR0955）上缺失2653个碱基，犬种布鲁氏菌在wbkF-wbkD区域缺失351个碱基，以... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
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中文摘要
Abstract
前言
第一篇 研究内容
    第一章 牛羊猪犬种布鲁氏菌多重 PCR 检测方法的建立
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 单对引物的 PCR 扩增
            2.2 单对引物 PCR 扩增产物的序列验证
            2.3 单对引物 PCR 的特异性
            2.4 多重 PCR 反应的建立
            2.5 多重 PCR 反应的优化
            2.6 多重 PCR 反应的特异性
            2.7 多重 PCR 反应的灵敏度
            2.8 多重 PCR 反应的重复性
            2.9 混合病原菌的检测
        3 讨论
            3.1 引物的设计
            3.2 多重 PCR 的影响因素
            3.3 多重 PCR 的初步评价
        4 小结
    第二章 牛羊猪犬种布鲁氏菌检测试剂盒的组装及初步应用
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 阳性质控品的制备
            2.2 试剂盒的性能评价
            2.3 样本检测
        3 讨论
            3.1 试剂盒的组装
            3.2 试剂盒的性能评价
            3.3 试剂盒的应用
        4 小结
    结论
第二篇 文献综述
    第一章 布鲁氏菌病概述
        1 布鲁氏菌病的流行病学
        2 布鲁氏菌病的病原体
        3 布鲁氏菌病的传播
        4 布鲁氏菌病的临床症状
        5 布鲁氏菌病的防控
    第二章 布鲁氏菌病检测方法的研究进展
        1 细菌学检测
        2 血清学检测
            2.1 试管凝集试验
            2.2 虎红平板凝集试验
            2.3 微量凝集试验
            2.4 乳汁环状凝集试验
            2.5 抗人免疫球蛋白试验
            2.6 免疫捕获凝集试验
            2.7 补体结合试验
            2.8 免疫胶体金层析法
            2.9 酶联免疫吸附试验
            2.10 荧光偏振测定法
        3 分子生物学检测法
            3.1 PCR 技术
            3.2 PCR 衍生技术
参考文献
附录
个人简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]全国布氏菌病干预试点县布氏菌病经济损失调查[J]. 刘凤岐,王大力,王季秋,李铁锋,赵永利,冮森林.  中国地方病防治杂志. 2008(06)
[2]多重PCR特异检测布鲁氏菌方法的建立[J]. 杜昕颖,陈泽良,王玉飞,乔凤,赵瑾,苑锡铜,黄留玉.  解放军预防医学杂志. 2008(05)
[3]布鲁氏菌VirB8-PCR方法的建立[J]. 钟旗,范伟兴,吴冬玲,蔡一非,何倩倪,热合木江 达吾提,谷文喜,赵兵,吐尔洪.  中国人兽共患病学报. 2008(01)

硕士论文
[1]食源性致病菌快速检测方法的建立及其试剂盒的研制与应用[D]. 周明东.山东农业大学 2012



本文编号：3189631