从江香猪lncGHR1基因的克

发布时间：2021-05-17 09:19

　　生长激素受体（growth hormone receptor, GHR）在动物生长发育过程中具有重要作用。为研究GHR基因相关长链非编码RNAs （long noncoding RNAs, lncRNAs）在从江香猪（Sus scrofa）不同组织中的表达规律,本研究以贵州从江香猪和大白猪为研究对象,以生长发育相关的miR-146b-3p为关联点,通过SWChen 2.3程序筛选GHR相关lncRNAs,对筛选出来的lncRNAs进行克隆验证。以候选lncRNA NONSUST017828.1 （GenBank No. TCONS₀0020564,命名为lncGHR1）为研究对象,对其进行生物信息学及组织表达谱分析,并构建lncGHR1-CMV超表达载体,转染至人源胚胎肾细胞（human embryonic kidney cells, HEK-293T）和从江香猪原代肌细胞,检测细胞增殖相关基因YAP （Yes-associated protein）和TAZ（transcription activator）的表达情况。结果显示,lncGHR1二级结构最小自由能为-... 

【文章来源】：农业生物技术学报. 2020,28(12)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验动物及样品采集
        1.1.2 主要试剂与仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 筛选与GHR基因相关lnc RNAs
        1.2.2 lnc GHR1生物信息学分析
        1.2.3 PCR引物设计与合成
        1.2.4 总RNA提取与c DNA合成
        1.2.5 目的片段扩增
        1.2.6 T克隆载体和超表达载体构建
        1.2.7 qRT-PCR
        1.2.8 统计分析
2 结果与分析
    2.1 筛选lnc RNAs
    2.2 lnc GHR1与mi RNAs的结合情况
    2.3 lnc GHR1的二级结构及开放阅读框预测
    2.4 lnc GHR1与不同物种GHR 3'UTR的序列比较
    2.5 克隆载体和重组载体的构建与鉴定
    2.6 lnc GHR1在从江香猪及大白猪中各组织的表达情况
    2.7 转染重组载体至HEK-293T和从江香猪原代肌细胞
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪PRKAA1基因相关LncRNAs的筛选及其在组织中的表达分析[J]. 吴小敏,倪锴,朱晓锋,谌颖莲,赵佳福,许厚强.  农业生物技术学报. 2020(02)
[2]从江香猪和大白猪不同组织/器官中GHR、JAK2、STAT3基因的表达分析[J]. 张鸣,许厚强,陈伟,王圆圆,杨洋,杨涛.  黑龙江畜牧兽医. 2018(21)
[3]GHR基因敲除香猪的鉴定及生长指标测定[J]. 陈伟,许厚强,喻昌毅,陈明飞,肖伟,张鸣,杨洋.  基因组学与应用生物学. 2016(12)
[4]反义长链非编码RNA与基因表达调控[J]. 蒋孝明,邵永富,肖丙秀,郭俊明.  生物物理学报. 2013(07)

博士论文
[1]MicroRNA-146b-3p通过靶向NF2促进甲状腺乳头状癌转移的研究[D]. 张莉.山东大学 2019



本文编号：3191514