脂联素（AdipoQ）及其受体（AdipoR1/2）对山羊脂肪沉积的作用机制研究

发布时间：2021-05-17 18:43

　　本试验目的是研究AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2对山羊脂肪沉积的作用机制,为后续通过AdipoQ来调控山羊肌肉中的脂肪酸合成,改善山羊肉品质提供依据。试验克隆得到南江黄羊AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因的全长编码区序列。利用半定量RT-PCR检测3个基因在山羊11个组织（皮下脂肪、背最长肌、股二头肌、腓肠肌、卵巢、子宫、脑、瘤胃、肾脏、肝脏和心脏）中的表达模式。利用qPCR检测AdipoQ、AdipoRl和AdipoR2基因在南江黄羊出生后5个发育阶段（3 d、30 d、60 d、90 d和120 d）背最长肌中mRNA的相对表达量。利用含高浓度葡萄糖的培养基（25 mM/L）诱导山羊骨骼肌卫星细胞（Skeletal muscle satellite cells, SMSCs）向脂肪细胞分化,油红O染色检测细胞内脂肪滴的沉积,qPCR检测AdipoQ、 AdipoR1、AdipoR2、脂肪酸合成及成脂分化相关基因的相对表达量。构建AdipoQ基因过表达载体pEGFP-N1-AD,并在山羊SMSCs中过表达AdipoQ基因。荧光显微镜检测融合蛋白的亚细胞定位,... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 AdipoQ及AdipoR1/2的研究进展
        1.1.1 AdipoQ的结构与分布
        1.1.2 AdipoR1/2的结构与分布
        1.1.3 AdipoQ及AdipoR1/2的生物学功能
            1.1.3.1 AdipoQ在骨骼肌中的功能
            1.1.3.2 AdipoQ在肝脏中的功能
            1.1.3.3 AdipoQ在心血管中的功能
            1.1.3.4 AdipoQ在肺中的功能
            1.1.3.5 AdipoQ与癌症的关系
        1.1.4 AdipoQ及AdipoR1/2的调控
            1.1.4.1 AdipoQ的表达分泌调节
            1.1.4.2 AdipoR1/2的表达分泌调节
    1.2 SMSCs简介
    1.3 本研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验组织样品
        2.1.2 山羊SMSCs
    2.2 仪器与试剂
        2.2.1 主要仪器
        2.2.2 主要试剂
    2.3 试验方法
        2.3.1 总RNA的提取
        2.3.2 总RNA的质量检测
        2.3.3 cDNA的合成
        2.3.4 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2基因的克隆
            2.3.4.1 引物设计
            2.3.4.2 RT-PCR扩增
            2.3.4.3 PCR产物胶回收
            2.3.4.4 目的基因的克隆
            2.3.4.5 目的基因的鉴定及测序
            2.3.4.6 生物信息学分析
        2.3.5 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2基因的表达分析
            2.3.5.1 目的基因定量引物设计
            2.3.5.2 半定量RT-PCR检测目的基因的组织表达模式
            2.3.5.3 qPCR检测目的基因在不同发育阶段背最长肌中的表达
        2.3.6 山羊SMSCs的成脂分化
            2.3.6.1 山羊SMSCs的培养及高糖诱导分化
            2.3.6.2 山羊SMSCs内脂肪滴的油红O染色
            2.3.6.3 脂肪酸合成及成脂分化相关基因引物设计
            2.3.6.4 qPCR检测脂肪酸合成及成脂分化相关基因表达
            2.3.6.5 脂肪酸合成及成脂分化基因的表达相关性分析
        2.3.7 AdipoQ基因在山羊SMSCs中的过表达
            2.3.7.1 载体构建
            2.3.7.2 质粒提取
            2.3.7.3 瞬时转染
            2.3.7.4 qPCR检测相关基因的表达
    2.4 统计分析
3 试验结果与分析
    3.1 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2的克隆及序列分析
        3.1.1 RNA质量的检测
        3.1.2 目的基因的克隆结果
        3.1.3 测序及生物信息学分析结果
        3.1.4 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2蛋白结构
    3.2 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2的组织表达
    3.3 AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2在背最长肌中的表达
    3.4 山羊SMSCs的诱导分化
        3.4.1 细胞中的脂肪滴沉积
        3.4.2 脂肪酸合成及成脂分化相关基因的表达
        3.4.3 分化过程中基因表达的相关性
    3.5 AdipoQ基因的过表达
        3.5.1 AdipoQ的载体构建
        3.5.2 AdipoQ的亚细胞定位
        3.5.3 AdipoQ对相关基因的调控
4 讨论
    4.1 基因的克隆及生物信息学分析
    4.2 基因的组织表达规律
    4.3 基因在背最长肌中的表达
    4.4 山羊SMSCs的成脂分化
    4.5 AdipoQ在SMSCs中的过表达
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]山羊SREBP-1基因的超表达对脂肪酸代谢相关基因表达的影响[J]. 许会芬,罗军,李芳,余康,石恒波,李君,林先滋,朱江江.  生物工程学报. 2012(11)

硕士论文
[1]猪脂联素和脂联素受体基因的mRNA表达对肌内脂肪含量和背膘厚的影响[D]. 陈其美.山东农业大学 2009



本文编号：3192254