猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

发布时间：2021-05-17 23:39

　　为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒（PRV）gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%～9.47%,批间变异系数为2.43%～14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒、细菌、细胞、血清及实验动物
    1.2 主要仪器和试剂
    1.3 抗PRV gB蛋白单克隆抗体的制备
    1.4 抗PRV gB蛋白单克隆抗体的鉴定
        1.4.1 Western blot分析
        1.4.2 特异性鉴定
        1.4.3 应用性鉴定
    1.5 PRV gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法(CLEIA)的建立
        1.5.1 最佳浓度的确定
        1.5.2 最佳缓冲液的确定
        1.5.3 最佳反应时间的确定
        1.5.4 校准品的制备
        1.5.5 临界值的确定
        1.5.6 特异性试验
        1.5.7 敏感性试验
        1.5.8 重复性试验
        1.5.9 保存期研究
        1.5.10 比对试验
2 结 果
    2.1 抗PRV gB蛋白单克隆抗体的制备
    2.2 单抗的特异性鉴定
    2.3 单抗的应用性鉴定
    2.4 PRV gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法(CLEIA)的建立
        2.4.1 最佳浓度的确定
        2.4.2 最佳缓冲液的确定
        2.4.3 最佳反应时间的确定
        2.4.4 校准品的制备
        2.4.5 临界值的确定
        2.4.6 特异性试验
        2.4.7 敏感性试验
        2.4.8 重复性试验
        2.4.9 保存期研究
        2.4.10 比对试验
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3192677