布鲁氏菌omp25基因缺失株的构建及对细胞自噬的影响

发布时间：2021-05-18 02:31

　　布鲁氏菌病是一种人畜共患的慢性传染病，动物感染该病后的表现为母畜的流产和公畜的睾丸炎，对人而言，感染该病后可引起人的波浪热，关节炎以及肌肉疼痛等。布鲁氏菌（Brucella）作为布鲁氏菌病的病原菌，其在宿主内的生存机制一直都是研究的热点。布鲁氏菌本身不产生内毒素，其逃避宿主的免疫系统的杀伤作用主要是通过各种毒力因子实现的，外膜蛋白就是布鲁氏菌的重要毒力因子之一，因此本文从布鲁氏菌的外膜蛋白基因omp25基因入手，通过以下三个实验在细胞水平和个体水平上探讨布鲁氏菌在侵袭宿主时，omp25基因缺失株的毒力和对细胞自噬的影响。1根据GenBank中发表的布鲁氏菌外膜蛋白基因omp25的基因序列，设计一对引物，通过PCR方法扩增omp25基因的DNA片段，将扩增片段克隆至T载体中，构建克隆载体pMD-T-omp25，经PCR筛选出阳性克隆菌并测序鉴定，分别将pET28a-GFP质粒和测序成功的pMD-T-omp25质粒用限制性内切酶EcoRⅠ、SalⅠ双酶切，并将回收的omp25基因片段、pET28a-GFP片段进行连接，构建原核表达载体pET28a-GFP-omp25，将表达载体转化至表达菌... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略词表
引言
第一章 文献综述 布鲁氏菌与自噬研究进展
    1 布鲁氏菌基本特征
        1.1 布鲁氏菌的分类与特点
        1.2 人布鲁氏菌病
        1.3 牛布鲁氏菌病
        1.4 非调理布鲁氏菌在细胞内的生存方式
        1.5 调理布鲁氏菌在细胞内的生存方式
        1.6 布鲁氏菌的毒力、胞内生存和复制
    2 布鲁氏菌外膜蛋白研究进展
        2.1 外膜蛋白概述
        2.2 第一组外膜蛋白
        2.3 第二组外膜蛋白
        2.4 第三组外膜蛋白
    3 布鲁氏菌与自噬研究进展
        3.1 自噬概述
        3.2 自噬的激活
        3.3 自噬与疾病
        3.4 自噬的监测方法
        3.5 布鲁氏菌与自噬
第二章 实验研究
    实验一 布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与表达
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 omp25基因PCR扩增结果
            2.2 测序结果
            2.3 重组表达质粒pET28a-GFP-omp25的酶切鉴定结果
            2.4 OMP25蛋白的表达和纯化结果
        3 讨论
    实验二 布鲁氏菌S2308Δomp25基因缺失株的构建及其稳定性检测
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 扩增omp25基因上、下游同源臂
            2.2 omp25基因上、下游同源臂融合PCR
            2.3 SacB基因的扩增
            2.4 酶切鉴定重组质粒（T载体）pMD19-omp2534
            2.5 酶切鉴定重组质粒（自杀载体）pGEM-7zf+-omp25-SacB
            2.6 布鲁氏菌omp25基因缺失株同源重组单双交换子的筛选
            2.7 2308Δomp25基因缺失株的遗传稳定性检测
            2.8 2308Δomp25基因缺失株毒力的初步评价
        3 讨论
            3.1 基因敲除技术
            3.2 电转化效率
            3.3 omp25基因缺失株毒力
    实验三 布鲁氏菌omp25基因缺失株对胚胎滋养层细胞的自噬作用
        摘要
        1 材料方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 激光共聚焦
            2.2 RNA提取
            2.3 实时定量检测
        3 讨论
            3.1 镜检样本制作的分析
            3.2 缺失株对细胞自噬的作用
结论
创新点
参考文献
致谢
作者简介
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]Gene expression changes in spleens of the wildlife reservoir species,Eurasian wild boar（Sus scrofa）,naturally infected with Brucella suis biovar 2[J]. Ruth C.Galindo,Pilar M.Muoz,María J.de Miguel,Clara M.Marin,Javier Labairu,Miguel Revilla,José M.Blasco,Christian Gortazar,José de la Fuente.  遗传学报. 2010(11)
[2]布鲁氏菌病对人的危害[J]. 应洪艳,宁秀云,刘海英,乔新宇,韩华.  畜牧兽医科技信息. 2009(01)
[3]卫生部、农业部关于加强布鲁氏菌病防治工作的通知[J].   中华人民共和国卫生部公报. 2008(01)
[4]布鲁氏菌病研究进展[J]. 毛开荣.  动物保健. 2006(09)
[5]新疆绵羊种布鲁氏菌OMP25基因的分子克隆及核苷酸序列的测定[J]. 柳建新,陈创夫,田晶华.  中国兽医杂志. 2005(11)
[6]绿色荧光蛋白（GFP）在分子遗传学上的研究进展[J]. 杨秀芹,刘娣,祖延涛.  黑龙江畜牧兽医. 2001(07)
[7]章丘市布鲁氏菌病疫点的调查及处理[J]. 梁普伟,张维栋,刘殿礼,郑应良,景慎文,张卫.  中国地方病防治杂志. 2000(03)



本文编号：3192939