一株新基因型禽戊型肝炎病毒VaHEV-HB株的致病性与全基因组分析

发布时间：2021-05-19 03:21

　　禽戊型肝炎病毒（Avian hepatitis E virus,aHEV）是鸡大肝大脾病（Big liver and spleen,BLS）和肝破裂出血综合征（Hepatic rupture and hemorrhage syndrome,HRHS）的主要病原,主要侵害30-72周龄的产蛋鸡群和肉种鸡群,造成腹腔积血,卵巢机能衰退,肝脏发生脂肪或淀粉样变性,偶尔出现肝脾肿大的现象,综合致死率约为1%。2016年以来,在我国多个鸡群中发生了以肝脾肿大和破裂等为主要表现的肝破裂出血综合征,在相关鸡群中多次鉴定到禽HEV并从河北某蛋种鸡场中鉴定到VaHEV-HB株。研究显示,相比于其他禽HEV参考株,该毒株致病性较强且能引起雏鸡发病。我国鸡群中流行的高强毒力禽HEV与国外已报道的禽HEV有何差别?感染鸡群诱导的免疫学反应是怎样的?本研究通过系统的动物试验研究了该毒株的致病性,通过荧光定量PCR技术和转录组测序从两方面综合评价VaHEV-HB株感染雏鸡后诱发的部分先天免疫反应指标,并对全基因组进行测序分析以探究其致病性升高的分子基础,为了解我国当前流行的禽HEV分子变异和致病机制提供参考数据。... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 HEV概况
        1.1.1 HEV研究进展
        1.1.2 HEV的基因组结构
        1.1.3 HEV的宿主
        1.1.4 HEV的传播
        1.1.5 HEV感染的临床表现
        1.1.6 HEV诊断方法
            1.1.6.1 分子生物学诊断方法
            1.1.6.2 免疫学诊断方法
            1.1.6.3 免疫电子显微镜检测
    1.2 禽HEV研究概况
        1.2.1 禽HEV病原学
        1.2.2 禽HEV的传播途径
        1.2.3 禽HEV症状
            1.2.3.1 肝炎脾大综合征临床症状
            1.2.3.2 大肝大脾病临床症状
        1.2.4 禽HEV感染病变
            1.2.4.1 肝炎脾大综合征病变
            1.2.4.2 大肝大脾病病变
        1.2.5 诊断
        1.2.6 防治
    1.3 禽类先天免疫
    1.4 转录组测序技术
        1.4.1 单细胞转录组测序
        1.4.2 全转录组测序
        1.4.3 mRNA测序技术
        1.4.4 小RNA测序技术
        1.4.5 长链非编码RNA测序技术
        1.4.6 环状RNA测序技术
    1.5 本研究的目的与意义
2.材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 毒株的背景及来源
        2.1.2 试验动物
        2.1.3 主要仪器与试剂
            2.1.3.1 主要仪器
            2.1.3.2 主要试剂
            2.1.3.3 试剂配制
    2.2 方法
        2.2.1 病毒的扩增与富集
        2.2.2 扩增病毒的验证
            2.2.2.1 用于禽HEV核酸检测引物的合成
            2.2.2.2 样品RNA的提取
            2.2.2.3 禽HEV的 RT-PCR检测
        2.2.3 部分先天免疫反应指标的检测
            2.2.3.1 试验分组
            2.2.3.2 试验指标
            2.2.3.3 用于检测免疫相关细胞因子的引物合成
            2.2.3.4 病料处理及RNA提取
            2.2.3.5 通过RT-qPCR检测部分先天免疫反应相关指标
            2.2.3.6 通过转录组测序检测免疫相关基因表达
        2.2.4 病毒全基因组的扩增、克隆及测序
            2.2.4.1 引物设计
            2.2.4.2 病毒RNA的 RT-PCR扩增
            2.2.4.3 RT-PCR扩增产物的凝胶回收纯化
            2.2.4.4 凝胶回收产物的连接
            2.2.4.5 连接产物的转化
            2.2.4.6 病毒末端测序
            2.2.4.7 基因序列分析
3 结果
    3.1 病毒的扩增与验证
    3.2 Va HEV-HB株感染对雏鸡生长的抑制作用
    3.3 Va HEV-HB株感染对雏鸡肝脏和脾脏的损伤情况
    3.4 Va HEV-HB株感染雏鸡后部分先天免疫反应指标的检测与分析
    3.5 转录组结果分析
    3.6 Va HEV-HB株基因组分析
        3.6.1 Va HEV-HB株基因组分析
        3.6.2 禽HEV ORF1和ORF3 的变异位点
        3.6.3 系统发育分析
        3.6.4 禽HEV与正戊肝病毒属A种 HEV的序列分析
4 讨论
    4.1 Va HEV-HB株感染SPF鸡致病性
    4.2 Va HEV-HB株全基因组分析
5 结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]转录组测序技术的研究和应用进展[J]. 崔凯,吴伟伟,刁其玉.  生物技术通报. 2019(07)
[2]鸡大肝大脾病毒RT-PCR检测方法的建立及其检测[J]. 马玉玲,杨德吉,陆承平.  中国病毒学. 2005(02)
[3]部分鸡场鸡大肝和大脾病的血清学调查[J]. 杨德吉,单松华,侯世忠,王亚菊,薄其云,徐福南.  中国兽医科技. 1997(06)



本文编号：3195013