表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S和N蛋白的重组杆状病毒的构建
发布时间：2021-05-19 06:06
鸡传染性支气管炎（Infectiousbronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起鸡的一种高度接触性传染病,给世界养禽业造成了巨大的经济损失。IBV基因组易发生变异和重组,从而产生多种血清型或变异型。临床上用于预防IB的常规疫苗即弱毒苗和灭活苗在效果、安全和成本方面都存在缺陷,因此研制高效、安全、廉价的新型疫苗显得非常重要。IBV结构蛋白中S1和N蛋白是主要免疫原,分别在体液免疫和细胞免疫中发挥重要作用,因此研发包括S1和N蛋白的新型疫苗具有良好的应用前景。昆虫杆状病毒表达系统作为一种成熟的表达系统,在外源蛋白的表达中具有重要的作用,该系统具有良好的翻译后加工能力,可以对重组外源蛋白进行信号肽剪切、糖基化修饰等。相关研究表明,应用杆状病毒表达系统时引入昆虫细胞能识别和剪切的蜂素（Honeybee melittin,HBM）信号肽能够介导外源蛋白以分泌表达的形式存在于培养上清,同时能够增强重组蛋白的表达量及糖基化修饰,表达的重组蛋白更接近天然构象。目前杆状病毒表达系统在IBV的应用只是对单个蛋白进行表达,尚没有...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写、符号说明
第一章 文献综述
1.1 鸡传染性支气管炎概述
1.2 昆虫杆状病毒表达系统概述
1.3 昆虫杆状病毒表达系统在主要家禽病毒病应用研究进展
1.3.1 诊断与检测
1.3.2 疫苗研究方面
1.4 本课题研究的主要内容及其目的和意义
第二章 表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株N蛋白的重组杆状病毒的构建
2.1 材料
2.1.1 IBV毒株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 载体和感受态细胞
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 目的基因的获取
2.2.2 重组克隆载体pEasy-HBM-N的构建及鉴定
2.2.3 重组转座载体pFast-HBM-N的构建及鉴定
2.2.4 重组杆粒rHBM-N的获取及纯化
2.3 结果
2.3.1 目的基因扩增
2.3.2 HBM-N基因的克隆载体的构建及鉴定
2.3.3 重组转座载体pFast-HBM-N的构建及鉴定
2.3.4 重组杆粒rHBM-N的获取及纯化
2.4 小结与讨论
第三章 表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S蛋白的重组杆状病毒的构建
3.1 材料
3.1.1 病毒及相关反应试剂
3.1.2 引物设计与合成
3.2 方法
3.2.1 S1、S基因及融合HBM信号肽HBM-S1、HBM-S的扩增
3.2.2 S1、S基因克隆载体的构建及鉴定
3.2.3 S1、S基因转座载体的构建及鉴定
3.2.4 重组杆粒rHBM-S1、r-S1、rHBM-S和r-S的鉴定及纯化
3.3 结果
3.3.1 目的基因扩增
3.3.2 克隆载体的构建及鉴定
3.3.3 重组转座载体的构建及鉴定
3.3.4 重组杆粒的获取及纯化
3.4 小结与讨论
3.4.1 S和S1蛋白的重转座载体的构建及鉴定
3.4.2 表达S和S1蛋白的重组杆粒的获取及纯化
第四章 共表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株N蛋白和S1蛋白的重组杆状病毒的构建
4.1 材料
4.1.1 载体
4.1.2 相关分子生物学试剂
4.2 方法
4.2.1 双元转座载体pFast-HBM-S1-N的构建及鉴定
4.2.2 双表达杆粒rHBM-S-N的获取及纯化
4.3 结果
4.3.1 重组转座载体pFast-HBM-S-N鉴定
4.3.2 重组杆粒rHBM-S-N鉴定及纯化
4.4 小结与讨论
第五章 结论
5.1 构建了携带蜂素信号肽的IBV GX-YL5株N蛋白的重组杆状病毒
5.2 构建了携带蜂素信号肽的IBV GX-YL5株S蛋白的重组杆状病毒
5.3 构建了携带蜂素信号肽的共表达IBV GX-YL5株S1和N蛋白的重组杆状病毒
创新点
参考文献
附录一
附录二
致谢
个人简历
攻读硕士学位期间论文发表情况及参与的科研项目
本文编号：3195262
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写、符号说明
第一章 文献综述
1.1 鸡传染性支气管炎概述
1.2 昆虫杆状病毒表达系统概述
1.3 昆虫杆状病毒表达系统在主要家禽病毒病应用研究进展
1.3.1 诊断与检测
1.3.2 疫苗研究方面
1.4 本课题研究的主要内容及其目的和意义
第二章 表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株N蛋白的重组杆状病毒的构建
2.1 材料
2.1.1 IBV毒株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 载体和感受态细胞
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 目的基因的获取
2.2.2 重组克隆载体pEasy-HBM-N的构建及鉴定
2.2.3 重组转座载体pFast-HBM-N的构建及鉴定
2.2.4 重组杆粒rHBM-N的获取及纯化
2.3 结果
2.3.1 目的基因扩增
2.3.2 HBM-N基因的克隆载体的构建及鉴定
2.3.3 重组转座载体pFast-HBM-N的构建及鉴定
2.3.4 重组杆粒rHBM-N的获取及纯化
2.4 小结与讨论
第三章 表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S蛋白的重组杆状病毒的构建
3.1 材料
3.1.1 病毒及相关反应试剂
3.1.2 引物设计与合成
3.2 方法
3.2.1 S1、S基因及融合HBM信号肽HBM-S1、HBM-S的扩增
3.2.2 S1、S基因克隆载体的构建及鉴定
3.2.3 S1、S基因转座载体的构建及鉴定
3.2.4 重组杆粒rHBM-S1、r-S1、rHBM-S和r-S的鉴定及纯化
3.3 结果
3.3.1 目的基因扩增
3.3.2 克隆载体的构建及鉴定
3.3.3 重组转座载体的构建及鉴定
3.3.4 重组杆粒的获取及纯化
3.4 小结与讨论
3.4.1 S和S1蛋白的重转座载体的构建及鉴定
3.4.2 表达S和S1蛋白的重组杆粒的获取及纯化
第四章 共表达鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株N蛋白和S1蛋白的重组杆状病毒的构建
4.1 材料
4.1.1 载体
4.1.2 相关分子生物学试剂
4.2 方法
4.2.1 双元转座载体pFast-HBM-S1-N的构建及鉴定
4.2.2 双表达杆粒rHBM-S-N的获取及纯化
4.3 结果
4.3.1 重组转座载体pFast-HBM-S-N鉴定
4.3.2 重组杆粒rHBM-S-N鉴定及纯化
4.4 小结与讨论
第五章 结论
5.1 构建了携带蜂素信号肽的IBV GX-YL5株N蛋白的重组杆状病毒
5.2 构建了携带蜂素信号肽的IBV GX-YL5株S蛋白的重组杆状病毒
5.3 构建了携带蜂素信号肽的共表达IBV GX-YL5株S1和N蛋白的重组杆状病毒
创新点
参考文献
附录一
附录二
致谢
个人简历
攻读硕士学位期间论文发表情况及参与的科研项目
本文编号：3195262
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3195262.html
