多胺对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响
发布时间：2021-05-20 17:28
多胺（polyamines,PAs）是一类含有两个及以上氨基、带正电的小分子脂肪族含氮碱,广泛存在于动物、植物、藻类和微生物体内,哺乳动物细胞中主要包括腐胺、亚精胺和精胺。研究表明,多胺在中东呼吸综合征病毒（middle east respiratory syndrome virus,MERS）、脊髓灰质炎病毒（poliovirus,PV）、寨卡病毒（zika,ZIKV）等多种病毒感染与复制中发挥着重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一种严重危害养猪业的病毒,主要引起母猪的繁殖障碍以及新生仔猪的大量死亡,给养猪业造成了巨大损失。目前,对多胺在PRRSV感染与复制中的作用尚无报道。本课题以多胺为切入点,探讨了多胺合成代谢途径与PRRSV复制之间的相互关系,初步揭示了多胺调控PRRSV增殖的机制,为阐明PRRSV的感染机制奠定了基础。主要研究内容与结果如下:1.PRRSV感染胞内多胺水平降低为了探讨PRRSV感染后,细胞内多胺水平的变化情况。将PRRSV接种PK-15
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(ABBREVIATION)
第1章 文献综述
1.1 多胺
1.1.1 多胺种类和化学结构
1.1.2 多胺与细胞
1.1.3 多胺与病毒
1.2 多胺的生物合成、分解代谢与转运
1.2.1 多胺的生物合成
1.2.2 鸟氨酸脱羧酶
1.2.3 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶
1.2.4 多胺的分解代谢
1.2.5 亚精胺/精胺乙酰化酶1
1.2.6 多胺的转运
1.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒
1.3.1 PRRSV病原特征
1.3.2 PRRSV基因组结构
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 细胞、毒株、菌株
3.1.2 载体
3.1.3 工具酶及主要试剂
3.1.4 Western Blot所需实验材料
3.1.5 培养基及其配制
3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制
3.1.7 主要实验仪器及设备
3.1.8 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 原代PAM细胞的分离
3.2.2 PRRSV增殖
3.2.3 RNA提取
3.2.4 野生型SAT1 及其酶活突变体真核表达质粒的构建
3.2.5 PCR产物或酶切产物的电泳检测
3.2.6 PCR产物或酶切产物的回收与纯化
3.2.7 限制性内切酶酶切反应
3.2.8 外源DNA片段与质粒载体的连接反应
3.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
3.2.10 连接产物的转化
3.2.11 重组质粒的制备与鉴定
3.2.12 质粒的转染
3.2.13 病毒滴度的测定
3.2.14 CellTiter-Glo?发光细胞活力测定法
3.2.15 MTT比色法
3.2.16 Western Blot
3.2.17 细胞多胺的薄层层析——荧光测定法
第4章 结果与分析
4.1 猪源pCAGGS-Flag-SAT1 野生型及酶活突变体真核表达质粒的构建
4.2 薄层色谱法展开溶剂的选择
4.3 多胺促进PRRSV增殖
4.3.1 下调胞内多胺水平拮抗PRRSV增殖
4.3.2 外源多胺的添加促进PRRSV增殖
4.4 亚精胺、精胺促进PRRSV增殖
4.5 PRRSV感染胞内多胺水平降低
4.6 SAT1 抑制PRRSV的增殖
4.6.1 PRRSV感染调控SAT1 mRNA水平
4.6.2 Ⅰ型干扰素上调SAT1 mRNA水平
4.6.3 SAT1 抑制PRRSV增殖
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 薄层色谱法对多胺的测定
5.1.2 多胺促进PRRSV增殖的潜在机制
5.1.3 SAT1 抑制PRRSV增殖的机制探讨
5.1.4 靶向多胺代谢的抗PRRSV药物展望
5.2 结论与课题展望
5.2.1 结论
5.2.2 课题展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]多胺的测定方法及其临床应用[J]. 沈佐君,杨树德. 国外医学.临床生物化学与检验学分册. 1994(05)
硕士论文
[1]高效液相色谱法测定海水中多胺的研究[D]. 付敏.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2010
本文编号：3198151
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表(ABBREVIATION)
第1章 文献综述
1.1 多胺
1.1.1 多胺种类和化学结构
1.1.2 多胺与细胞
1.1.3 多胺与病毒
1.2 多胺的生物合成、分解代谢与转运
1.2.1 多胺的生物合成
1.2.2 鸟氨酸脱羧酶
1.2.3 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶
1.2.4 多胺的分解代谢
1.2.5 亚精胺/精胺乙酰化酶1
1.2.6 多胺的转运
1.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒
1.3.1 PRRSV病原特征
1.3.2 PRRSV基因组结构
第2章 研究目的与意义
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 细胞、毒株、菌株
3.1.2 载体
3.1.3 工具酶及主要试剂
3.1.4 Western Blot所需实验材料
3.1.5 培养基及其配制
3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制
3.1.7 主要实验仪器及设备
3.1.8 分子生物学分析软件
3.2 实验方法
3.2.1 原代PAM细胞的分离
3.2.2 PRRSV增殖
3.2.3 RNA提取
3.2.4 野生型SAT1 及其酶活突变体真核表达质粒的构建
3.2.5 PCR产物或酶切产物的电泳检测
3.2.6 PCR产物或酶切产物的回收与纯化
3.2.7 限制性内切酶酶切反应
3.2.8 外源DNA片段与质粒载体的连接反应
3.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
3.2.10 连接产物的转化
3.2.11 重组质粒的制备与鉴定
3.2.12 质粒的转染
3.2.13 病毒滴度的测定
3.2.14 CellTiter-Glo?发光细胞活力测定法
3.2.15 MTT比色法
3.2.16 Western Blot
3.2.17 细胞多胺的薄层层析——荧光测定法
第4章 结果与分析
4.1 猪源pCAGGS-Flag-SAT1 野生型及酶活突变体真核表达质粒的构建
4.2 薄层色谱法展开溶剂的选择
4.3 多胺促进PRRSV增殖
4.3.1 下调胞内多胺水平拮抗PRRSV增殖
4.3.2 外源多胺的添加促进PRRSV增殖
4.4 亚精胺、精胺促进PRRSV增殖
4.5 PRRSV感染胞内多胺水平降低
4.6 SAT1 抑制PRRSV的增殖
4.6.1 PRRSV感染调控SAT1 mRNA水平
4.6.2 Ⅰ型干扰素上调SAT1 mRNA水平
4.6.3 SAT1 抑制PRRSV增殖
第5章 讨论与结论
5.1 讨论
5.1.1 薄层色谱法对多胺的测定
5.1.2 多胺促进PRRSV增殖的潜在机制
5.1.3 SAT1 抑制PRRSV增殖的机制探讨
5.1.4 靶向多胺代谢的抗PRRSV药物展望
5.2 结论与课题展望
5.2.1 结论
5.2.2 课题展望
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]多胺的测定方法及其临床应用[J]. 沈佐君,杨树德. 国外医学.临床生物化学与检验学分册. 1994(05)
硕士论文
[1]高效液相色谱法测定海水中多胺的研究[D]. 付敏.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2010
本文编号：3198151
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3198151.html
