禽流感病毒RT-LAMP系列检测方法的建立和应用
发布时间：2021-05-20 23:40
A型流感病毒属于正粘病毒科,病毒基因组共有8个片段,至少编码11种蛋白。病毒粒子表面囊膜上有血凝素（hemagglut inin, HA）与神经氨酸酶（neuraminidase, NA）两种表面纤突。根据HA与NA的不同可区分为不同的亚型,H有H1-H16,而N有N1～N10。禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）血清亚型众多,抗原变异性强,宿主范围广泛,亚型之间无交叉保护性。在禽流感的HA亚型中,只有H5和H7亚型对禽是高致病性的,称为高致病性禽流感（High pathogenic avian influenza, HPAI）。近年在全球时见报道的主要是H5N1和H7N1亚型以及去年报道的H7N9亚型AIV。比如1997年香港H5N1亚型AIV直接感染人并致死；1999-2000年在意大利爆发的H7N1病毒导致1300多万羽鸡死亡,造成重大经济损失；2003年荷兰爆发了H7N7亚型禽流感,不仅导致了重大的经济损失,而且感染89人。去年爆发的H7N9亚型AIV,造成超过300余人感染,50多人死亡。这些事件提示高致病性禽流感不仅会给养禽业造成巨大经济损失,同...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 研究的目的和意义
1.2 文献综述
1.2.1 禽流感分子生物学研究进展
1.2.2 禽流感公共卫生意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验毒株
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器设备
2.1.4 细胞、菌株、载体
2.1.5 实验动物
2.1.6 临床样品
2.2 试验方法
2.2.1 RNA的提取
2.2.2 MDCK细胞的培养
2.2.3 AIV尿囊液病毒扩增和细胞噬斑测定
2.2.4 RT-LAMP扩增体系条件的优化
2.2.5 特异性试验
2.2.6 敏感性试验
2.2.7 RT-PCR试验方法及其引物序列
2.2.8 病毒分离
2.2.9 动物人工感染实验
2.2.10 人工感染试验样品和临床样品的采集与处理
3 结果与分析
3.1 AIV尿囊液病毒扩增和细胞噬斑测定结果
3.2 禽流感病毒通用型LAMP快速检测方法的建立及评估
3.2.1 引物设计
3.2.2 RT-LAMP扩增体系条件的建立
3.2.3 特异性试验结果
3.2.4 敏感性试验结果
3.2.5 已知AIV分离毒株的检测
3.2.6 人工感染试验样品的检测
3.3 H9亚型AIV LAMP快速检测方法的建立及评估
3.3.1 引物设计
3.3.2 H9-RT-LAMP扩增体系和条件
3.3.3 H9-RT-LAMP特异性试验结果
3.3.4 H9亚型AIV LAMP的敏感性试验结果
3.3.5 H9 AIV LAMP人工感染棉拭子样品的检测结果
3.4 H5亚型AIV LAMP快速检测方法的建立及评估
3.4.1 引物设计
3.4.2 RT-LAMP扩增体系和条件
3.4.3 H5型AIVRT-LAMP的特异性试验结果
3.4.4 H5亚型AIV LAMP的敏感性试验结果
3.4.5 H5 AIV LAMP对不同宿主来源的H5 AIV分离株检测结果
3.5 H7N9亚型AIVRT-LAMP快速检测方法的建立及评估
3.5.1 引物设计
3.5.2 H7-RT-LAMP扩增体系条件的优化建立
3.5.3 H7亚型AIV LAMP的特异性试验结果
3.5.4 H7亚型AIV强弱毒株敏感性的试验结果
3.5.5 H7亚型RT-LAMP对H7N9AIV不同来源分离株的检测结果
3.5.6 H7亚型AIV LAMP人工感染样品检测结果
3.5.7 N9亚型RT-LAMP扩增体系条件的优化确定
3.5.8 N9亚型RT-LAMP的特异性试验结果
3.5.9 N9亚型RT-LAMP敏感性的试验结果
3.5.10 H7N9亚型RT-LAMP对H7N9病料及样品检测的试验结果
4 讨论
4.1 A型AIVRT-LAMP检测方法的研究
4.2 H9亚型RT-LAMP检测方法的研究
4.3 H5亚型RT-LAMP检测方法的研究
4.4 H7N9亚型RT-LAMP检测方法的研究
5 结论
致谢
参考文献
附录A
附录B
攻读博士学位期间发表的学术论文
本文编号：3198639
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：87 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
1.1 研究的目的和意义
1.2 文献综述
1.2.1 禽流感分子生物学研究进展
1.2.2 禽流感公共卫生意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 试验毒株
2.1.2 试剂
2.1.3 仪器设备
2.1.4 细胞、菌株、载体
2.1.5 实验动物
2.1.6 临床样品
2.2 试验方法
2.2.1 RNA的提取
2.2.2 MDCK细胞的培养
2.2.3 AIV尿囊液病毒扩增和细胞噬斑测定
2.2.4 RT-LAMP扩增体系条件的优化
2.2.5 特异性试验
2.2.6 敏感性试验
2.2.7 RT-PCR试验方法及其引物序列
2.2.8 病毒分离
2.2.9 动物人工感染实验
2.2.10 人工感染试验样品和临床样品的采集与处理
3 结果与分析
3.1 AIV尿囊液病毒扩增和细胞噬斑测定结果
3.2 禽流感病毒通用型LAMP快速检测方法的建立及评估
3.2.1 引物设计
3.2.2 RT-LAMP扩增体系条件的建立
3.2.3 特异性试验结果
3.2.4 敏感性试验结果
3.2.5 已知AIV分离毒株的检测
3.2.6 人工感染试验样品的检测
3.3 H9亚型AIV LAMP快速检测方法的建立及评估
3.3.1 引物设计
3.3.2 H9-RT-LAMP扩增体系和条件
3.3.3 H9-RT-LAMP特异性试验结果
3.3.4 H9亚型AIV LAMP的敏感性试验结果
3.3.5 H9 AIV LAMP人工感染棉拭子样品的检测结果
3.4 H5亚型AIV LAMP快速检测方法的建立及评估
3.4.1 引物设计
3.4.2 RT-LAMP扩增体系和条件
3.4.3 H5型AIVRT-LAMP的特异性试验结果
3.4.4 H5亚型AIV LAMP的敏感性试验结果
3.4.5 H5 AIV LAMP对不同宿主来源的H5 AIV分离株检测结果
3.5 H7N9亚型AIVRT-LAMP快速检测方法的建立及评估
3.5.1 引物设计
3.5.2 H7-RT-LAMP扩增体系条件的优化建立
3.5.3 H7亚型AIV LAMP的特异性试验结果
3.5.4 H7亚型AIV强弱毒株敏感性的试验结果
3.5.5 H7亚型RT-LAMP对H7N9AIV不同来源分离株的检测结果
3.5.6 H7亚型AIV LAMP人工感染样品检测结果
3.5.7 N9亚型RT-LAMP扩增体系条件的优化确定
3.5.8 N9亚型RT-LAMP的特异性试验结果
3.5.9 N9亚型RT-LAMP敏感性的试验结果
3.5.10 H7N9亚型RT-LAMP对H7N9病料及样品检测的试验结果
4 讨论
4.1 A型AIVRT-LAMP检测方法的研究
4.2 H9亚型RT-LAMP检测方法的研究
4.3 H5亚型RT-LAMP检测方法的研究
4.4 H7N9亚型RT-LAMP检测方法的研究
5 结论
致谢
参考文献
附录A
附录B
攻读博士学位期间发表的学术论文
本文编号：3198639
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