布拉氏酵母菌表面展示系统的构建及应用研究

发布时间：2021-05-21 01:11

　　布拉氏酵母菌是一种从印尼荔枝等水果中分离到的非致病性益生酵母菌，具有抗菌、抗毒、止泻、维持宿主胃肠道微生态平衡、提高机体非特异性免疫力等益生性。目前，布拉氏酵母菌的研究主要集中在临床应用方面，而针对其作用机制，特别是在分子水平上的作用机制，以及遗传改造等却少有研究和报导。自Smith提出表面展示技术以来，表面展示技术得到了快速发展。对于真核生物蛋白来说，酵母表面展示系统无疑是比较理想的表面展示系统。利用益生菌表面展示系统研究活载体疫苗是医学以及兽医学领域中重要的应用之一，人们已经利用酿酒酵母和乳酸杆菌作为平台研究活载体疫苗，而布拉氏酵母菌作为最有价值的益生菌之一，其表面展示系统在国内外尚未有报导。本研究利用a-凝集素成功地构建了两种布拉氏酵母菌表面展示系统：瞬时表达表面展示系统和稳定表达表面展示系统。这是第一次将表面展示技术用于布拉氏酵母菌中，拓宽了布拉氏酵母菌的应用领域。本研究主要做了以下三方面的工作：（一）瞬时表达表面展示系统：1.瞬时表达表面展示质粒的构建：将AGA1基因（SbAGA1）以及AGA2表达盒克隆到基础质粒pSP-G1上，使SbAGA1在持续表达启动子pTEF1的控制... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
符号及缩略词
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 布拉氏酵母菌
        1.1.1 布拉氏酵母菌的生物学特性
        1.1.2 益生性以及作用机制
        1.1.3 应用
    1.2 微生物表面展示
        1.2.1 噬菌体表面展示技术
        1.2.2 细菌表面展示系统
        1.2.3 酵母表面展示系统
        1.2.4 应用
    1.3 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株以及质粒载体
        2.1.2 试剂
        2.1.3 主要设备
    2.2 方法
        2.2.1 试验所用溶液的配制
        2.2.2 目的基因的获取
        2.2.3 瞬时表达表面展示质粒构建
        2.2.4 构建 EGFP 瞬时表达表面展示质粒
        2.2.5 构建 EtMic2 瞬时表达表面展示质粒
        2.2.6 稳定表达表面展示质粒 pLSDSb 和 pLSDSb2 的构建
        2.2.7 构建 EGFP 稳定表达表面展示质粒
        2.2.8 SbAGA1、SbAGA2 基因序列测序与分析
        2.2.9 酵母转染
        2.2.10 阳性重组子的筛选
        2.2.11 阳性重组子的培养
        2.2.12 间接免疫荧光
        2.2.13 流式细胞仪分析
        2.2.14 Western blot
3 结果与分析
    3.1 序列分析结果
        3.1.1 SbAGA1 基因序列分析结果
        3.1.2 SbAGA2 基因序列分析结果
    3.2 瞬时表达表面展示系统展示 EGFP
        3.2.1 瞬时表达表面展示质粒构建结果
        3.2.2 重组质粒的鉴定结果
        3.2.3 EGFP 在酵母细胞表面展示结果
        3.2.4 Western blot 结果
    3.3 稳定表达表面展示系统展示 EGFP
        3.3.1 稳定表达表面展示质粒的构建结果
        3.3.2 pLSDSb-GFP 和 pLSDSb2-GFP 质粒鉴定结果
        3.3.3 EGFP 表面展示结果
    3.4 布拉氏酵母菌表面展示系统的应用研究
        3.4.1 pSDSb-MIC2 和 pSDSb2-MIC2 质粒鉴定结果
        3.4.2 EtMic2 在酵母细胞表面展示结果
        3.4.3 V5 标签的染色结果
        3.4.4 Western blot 结果
4 讨论
5 结论
6 参考文献
7 致谢
8 硕士期间发表的论文



本文编号：3198771