血清型特异性水泡性口炎病毒同步检测和鉴别方法的建立

发布时间：2021-05-21 00:42

　　为准确地鉴别诊断新泽西型水泡性口炎病毒（VSV-NJ）和印第安纳型水泡性口炎病毒（VSV-IND）,本研究建立了可以同时检测和鉴别诊断VSV-NJ和VSV-IND的双重荧光RT-PCR方法,并对方法性能进行了测试和初步应用。结果显示,建立的双重荧光RT-PCR特异性为100%,最低检测限1～10个拷贝/μL,扩增效率E值均在99%左右,R2值分别为0.999和0.998。VSV-NJ和VSV-IND单荧光RT-PCR与双重荧光RT-PCR的相关性系数分别为0.999 7和0.999 4,与单荧光RT-PCR相比,该引物和探针的双重体系混合对特异性和敏感性均未产生明显干扰。用已知VSV-NJ及VSV-IND阳性核酸验证,发现符合率为100%,对50份临床样品的检测均为阴性,与单荧光RT-PCR结果一致。本研究建立的双重荧光RT-PCR方法实现了VSV-NJ和VSV-IND的同步检测和鉴别,为水泡性口炎的防控提供了技术储备。 

【文章来源】：中国动物检疫. 2020,37(10)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验质控品
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 引物和探针设计与合成
    1.4 阳性质控品浓度测定
    1.5 双重荧光RT-PCR反应
    1.6 标准曲线绘制和最低检测限确定
    1.7 特异性测试
    1.8 双重荧光RT-PCR和单荧光RT-PCR比较
    1.9 方法验证
2 结果
    2.1 阳性质控品定量
    2.2 标准曲线和最低检测限
    2.3 特异性检测
    2.4 双重荧光RT-PCR和单荧光RT-PCR比较
    2.5 验证
3 讨论



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