二花脸猪皮下与肌内脂肪组织基因表达谱比较及脂肪差异沉积调控机制初探

发布时间：2021-05-21 03:17

　　猪肌内脂肪的沉积是一个复杂的生理过程。由于长期追求高瘦肉率低背膘厚的育种目的,使得肌内脂肪含量的下降。提高肌内脂肪含量,同时不影响其它部位脂肪的沉积成为猪育种的一个重要目标。机体的脂肪组织被限定在特定的部位,并且不同部位的脂肪在脂肪前体细胞分化与脂肪代谢能力上存在着差异,这为寻找调控脂肪在不同组织差异沉积的分子机理提供了可能性。为了解皮下脂肪与肌内脂肪差异沉积的分子机制,我们首先通过基因芯片对皮下脂肪与肌内脂肪的基因表达谱进行比较研究,在此基础上选择在两种组织差异表达、且对脂肪分化与沉积起关键调控作用的PPARy基因为研究对象,从miRNA表观调控、肌肉分泌因子调控以及核受体共激活因子影响等角度,进一步分析组织间PPARy表达差异的分子调控机制。主要实验结果如下：1、利用Affymetrix表达谱芯片对7月龄二花脸猪胸腰接合处的皮下脂肪组织与背最长肌中肌内脂肪组织的mRNA表达水平进行了检测。结果显示有1228个基因在皮下脂肪中高表达,有965个基因在肌内脂肪中高表达。通过GO和KEGG分析,发现皮下脂肪组织在脂肪代谢与脂肪酸代谢方面强于肌内脂肪组织。结果显示：脂肪分化与沉积的关键基因... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：131 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语中英文对照(Abbreviation)
第一篇 文献综述
    第一章 脂肪细胞分化及信号调控
        1 脂肪细胞的起源
        2 脂肪细胞的分化过程
        3 脂肪细胞分化过程中的关键转录因子
            3.1 C/EBPs
            3.2 PPARγ
            3.3 SREBP1c
            3.4 KLFs
        4 脂肪细胞分化过程中的信号通路
            4.1 Wnt信号通路
            4.2 TGFβ/BMPs信号通路
            4.3 胰岛素与IGF1信号通路
            4.4 FGF信号通路
            4.5 Notch信号通路
            4.6 DLK/PREF1信号通路
            4.7 MAPK信号通路
            4.8 SHH信号通路
            4.9 其它调控
        参考文献
    第二章 去分化脂肪细胞的研究进展
        1 DFAT细胞的获得
        2 DFAT细胞在成脂分化中的优势
        3 DFAT细胞的多能性
        4 DFAT细胞与成熟脂肪细胞、MSCs细胞、iPS细胞的比较
        5 总结与展望
        参考文献
    第三章 不同部位脂肪差异的研究
        1 内脏脂肪与皮下脂肪在人、小鼠中的差异研究
        2 动物生产中不同部位脂肪组织的差异研究
        3 脂肪细胞的异质性
        参考文献
第二篇 实验部分
    第四章 二花脸猪皮下脂肪与肌内脂肪表达谱芯片分析
        1 实验方法
            1.1 实验动物及样品采集
            1.2 RNA提取
            1.3 基因芯片分析
            1.4 RT-qPCR
            1.5 数据统计
        2 实验结果
            2.1 差异表达的基因
            2.2 差异基因的GO与KEGG分析
        参考文献
    第五章 “天花板”法获取去分化的肌内脂肪细胞
        1 实验方法
            1.1 实验动物及样品采集
            1.2 细胞分离
            1.3 原代细胞培养
            1.4 细胞的传代培养与冻存
            1.5 细胞增殖检测
            1.6 RNA提取
            1.7 RT-qRCR
            1.8 油红O染色
            1.9 去分化肌内脂肪细胞的成脂诱导
            1.10 数据统计
        2 实验结果
            2.1 成熟肌内脂肪细胞的获得与自动去分化
        2.2 后代细胞的生长曲线与成脂分化
            2.3 DEX、INS与IBMX对后代细胞成脂分化能力的影响
        3 讨论
        参考文献
    第六章 miR-130a通过靶向调控PPARγ的表达来影响脂肪在皮下脂肪组织与肌内脂肪组织中的沉积
        1 实验方法
            1.1 实验动物及样品采集
            1.2 mRNA的提取
            1.3 RT-qPCR
            1.4 Werstern Blot
            1.5 miRNA预测
            1.6 miRNA的RT-qPCR
            1.7 质粒构建
            1.8 miRNA靶向性验证
            1.9 mimic超表达
            1.10 油红O染色
            1.11 数据统计
        2 实验结果
            2.1 PPARγ表达量的比较
            2.2 miRNA的表达水平比较
            2.3 miRNA靶向性验证
            2.4 miR-130a对肌内DFAT细胞成脂分化的影响
        3 讨论
        参考文献
    第七章 Myostatin对肌内DFAT细胞增殖、成脂分化能力以及对肌内脂肪脂解作用的影响
        1 实验方法
            1.1 肌肉组织培养液的获得
            1.2 细胞增殖检测
            1.3 DFAT细胞的成脂诱导
            1.4 油红O染色
            1.5 RT-qPCR
            1.6 脂解能力检测
            1.7 背最长肌与血清的采集
        1.8 肌内脂肪含量的测量
            1.9 MSTN的ELISA检测
            1.10 数据统计
        2 实验结果
            2.1 肌肉组织培养液对成脂分化的影响
            2.2 MSTN对肌内DFAT细胞增殖的影响
            2.3 MSTN对成脂分化的影响
            2.4 MSTN对脂肪分解的影响
            2.5 MSTN mRNA表达量对肌内脂肪含量的影响
            2.6 血清中MSTN蛋白含量对猪肌内脂肪含量的影响
        3 讨论
        参考文献
    第八章 SRC-2对肌内DFAT细胞成脂分化的影响
        1 实验方法
            1.1 SRC-2干扰链的设计
            1.2 siRNA转染条件的确定
            1.3 siRNA转染肌内DFAT细胞
            1.4 肌内DFAT细胞成脂诱导
            1.5 油红O染色
            1.6 mRNA提取与RT-qPCR
            1.7 数据统计
        2 实验结果
            2.1 SRC-2在脂肪分化过程中的时序表达
            2.2 siRNA转染条件的确定
            2.3 干扰效率的检测
            2.4 SRC-2对肌内DFAT细胞成脂分化的影响
        3 讨论
        参考文献
全文结论
创新点
附录
    附录一 文章所用的定量引物序列
    附录二 在皮下脂肪中高表达的基因
    附录三 在肌内脂肪中高表达的基因
    附录四 试剂、仪器与溶液
致谢
攻读博士学位期间发表的论文



本文编号：3198942