LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺脏内分布的研究

发布时间：2021-05-21 12:22

　　为探究LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺组织中的定位和表达,探讨这两种细胞因子对牦牛肺脏低氧适应性结构形成的可能调控作用。论文选取新生（1⁷日龄）、半岁（5⁶月龄）、成年（3⁶岁）和老年（7¹0岁）健康牦牛肺组织样品作为研究对象,首先采用RT-PCR技术克隆牦牛LRPP6和VEGFR2基因序列,并进行相关生物信息学分析;之后运用qRT-PCR、ELISA和Western-blot实验方法,从mRNA和蛋白两个方面探讨不同年龄牦牛肺脏中LRP6和VEGFR2的表达情况;最后采用免疫组织化学技术,对LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺脏内的准确的分布位置和表达量进行研究。结果表明:1.克隆得到牦牛LRP6基因（GenBank登录号:MF776096）,其牦牛开放阅读框长度为624bp,起始密码子位于41bp处,终止密码子位于664bp处,编码207个氨基酸。同源性分析和系统进化树显示,牦牛LRP6基因与野牦牛、北美野牛和绵羊的进化水平较为相近,与人、猕猴和食蟹猴进化水平较远。克隆得到牦牛VEGFR... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
SUMMARY
缩略词表
引言
第一部分 文献综述
    1.肺脏的组织结结构
    2.牦牛肺脏高原适应性研究
    3.肺脏WNT/β-CATENIN信号通路
        3.1 WNT蛋白
        3.2 经典WNT信号通路
        3.3 肺脏WNT/β-CATENIN信号通路的相关研究
    4.LRP6的相关研究
        4.1 LRP基因家族
        4.2 LRP6在肺脏的研究
    5.VEGFR2和相关配体的研究
        5.1 VEGF相关受体的分子特性
        5.2 VEGFR2在血管发育的机制
        5.3 VEGFR2在肺脏的分布
第二部分 实验部分
    1.材料与方法
        1.1 组织取材与处理
            1.1.1 组织取材及保存
            1.1.2 石蜡切片制作
        1.2 实验仪器与抗体
            1.2.1 实验仪器及设备
            1.2.2 抗体及检测系统
        1.3 ELISA检测
            1.3.1 蛋白样品的提取
            1.3.2 实验步骤
        1.4 WESTERNBLOT
        1.5 总RNA提取及质量鉴定
            1.5.1 总RNA提取
        1.6 牦牛LRP6和VEGFR2基因克隆
            1.6.1 目的片段的获取及回收
            1.6.2 基因的克隆与测序
            1.6.3 基因的生物信息学分析
        1.7 荧光定量PCR引物设计及扩增
            1.7.1 荧光定量引物设计
            1.7.2 荧光定量PCR
        1.8 免疫组织化学
        1.9 数据统计
    2.结果
        2.1 LRP6和VEGFR2在不同年龄牦牛肺脏中的表达情况
        2.2 牦牛LRP6和VEGFR2基因的生物信息学分析
            2.2.1 牦牛LRP6和VEGFR2基因开放阅读框
            2.2.2 牦牛LRP6和VEGFR2基因同源性分析
        2.3 RT-PCR结果
            2.3.1 LRP6基因mRNA在不同年龄牦牛肺脏组织的表达情况
            2.3.2 VEGFR2基因mRNA在不同年龄牦牛肺脏组织的表达情况
        2.4 免疫组化结果
            2.4.1 不同年龄牦牛肺脏内LRP6的分布
            2.4.2 不同年龄段牦牛肺脏VEGFR2的分布
    3.讨论
        3.1 LRP6和VEGFR2基因的相关分析
        3.2 LRP6在不同年龄牦牛肺脏的分布
        3.3 VEGFR2在不同年龄牦牛肺脏的分布
    4.结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]牦牛胎儿肺脏发育的形态学研究[J]. 杨琨,余四九,何俊峰,崔燕.  兽类学报. 2012(04)
[2]成年牦牛支气管动脉的组织结构观察[J]. 马兴斌,崔燕,何俊峰,杨波.  中国兽医科学. 2011(03)
[3]不同年龄高原牦牛肺脏的组织结构特征[J]. 何俊峰,余四九,崔燕.  畜牧兽医学报. 2009(05)
[4]成年牦牛肺动脉的显微结构观察[J]. 靳新花,崔燕,何俊峰,杨波.  中国兽医科学. 2009(03)
[5]高原牦牛肺血管内皮生长因子的分布[J]. 何俊峰,崔燕.  中国兽医科学. 2008(12)
[6]成年牦牛心室壁微血管的形态特征[J]. 崔燕,贺延玉,王剑.  兽类学报. 2008(03)
[7]成年牦牛心室肌微血管床的形态学特征[J]. 贺延玉,崔燕.  中国兽医科学. 2007(04)
[8]牦牛肺脏高原适应性的结构研究[J]. 陈秋生,冯霞,姜生成.  中国农业科学. 2006(10)
[9]不同海拔地区牦牛的肺组织形态学比较[J]. 张勤文.  中国兽医科技. 2004(02)
[10]血管内皮生长因子及其受体KDR在成熟期大鼠肺内的表达[J]. 陈劲龙,冉丕鑫.  广州医学院学报. 2003(04)

博士论文
[1]不同年龄牦牛肺脏支气管系的形态结构[D]. 杨波.甘肃农业大学 2010



本文编号：3199698