YAP对梅花鹿鹿茸间充质细胞及软骨细胞增殖与分化的影响

发布时间：2021-05-21 12:24

　　鹿茸角是一种失去后可完全再生的器官。因此,鹿茸角提供了研究哺乳动物器官再生的理想模型。同时,鹿茸也是名贵的传统中药,入药历史悠久。鹿茸角生长过程包括骨膜干细胞分化成间充质细胞、间充质细胞分化成软骨细胞等过程,在这一系列过程中,各种细胞在一些生长因子等的作用下不断增殖与分化,处在一个动态平衡中,维持着鹿茸角的生长发育。YAP（Yes-associated protein）是Hippo信号通路中起关键作用的开关蛋白,在细胞正常生长发育过程中调节细胞的增殖和存活,并在控制器官生长、干细胞自我更新和细胞分化中起重要作用。本试验以梅花鹿为研究对象,通过EDU、流式细胞术、荧光定量PCR等方法,研究了YAP对梅花鹿鹿茸间充质细胞及软骨细胞增殖与分化的影响,并探讨了其调节机理。分离培养鹿茸间充质细胞,添加一定浓度的YAP抑制剂（Verteporfin）。结果表明,Verteporfin能够显著抑制YAP在鹿茸间充质细胞中的表达,并能显著抑制鹿茸间充质细胞的增殖活性。通过流式细胞术检测发现,Verteporfin通过增加G0/G1期细胞的百分比,降低S期细胞的百分比,抑制间充质细胞的增殖进程。同时,V... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩写词表
前言
第一篇 文献综述
    第1章 鹿茸角的生物学特性
        1.1 鹿茸角的再生机理
        1.2 鹿茸角的创伤修复
        1.3 鹿茸角的生长
    第2章 YAP的研究进展
        2.1 Hippo信号通路
        2.2 YAP对干细胞分化的影响
        2.3 YAP对骨发育的影响
        2.4 YAP与ROS
        2.5 YAP与Nrf2
第二篇 研究内容
    第1章 YAP对鹿茸间充质细胞增殖与分化的影响
        1.1 材料和方法
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂与仪器
            1.1.3 鹿茸取材
            1.1.4 鹿茸间充质细胞的分离培养
            1.1.5 EdU法
            1.1.6 流式细胞术检测细胞周期
            1.1.7 荧光定量PCR
                1.1.7.1 引物设计
                1.1.7.2 鹿茸间充质细胞RNA提取与反转录
                1.1.7.3 PCR反应
            1.1.8 ROS的检测
            1.1.9 超氧阴离子的检测
            1.1.10 细胞线粒体中ROS的检测
            1.1.11 数据统计分析
        2.1 结果
            2.1.1 YAP对鹿茸间充质细胞增殖的影响
            2.1.2 YAP对鹿茸间充质细胞细胞周期的影响
            2.1.3 YAP对鹿茸间充质细胞细胞周期蛋白及蛋白激酶表达的影响
            2.1.4 YAP对鹿茸间充质细胞分化的影响
            2.1.5 YAP对鹿茸间充质细胞中ROS含量的影响
            2.1.6 YAP对鹿茸间充质细胞中超氧阴离子的影响
            2.1.7 YAP对鹿茸间充质细胞中线粒体ROS的影响
            2.1.8 YAP通过ROS对鹿茸间充质细胞分化的影响
        3.1 讨论
    第2章 YAP对鹿茸软骨细胞增殖与分化的影响
        2.1 材料和方法
            2.1.1 实验动物和试剂
            2.1.2 鹿茸取材
            2.1.3 鹿茸软骨细胞的分离培养
            2.1.4 EdU法
            2.1.5 流式细胞术检测细胞周期
            2.1.6 荧光定量PCR
            2.1.7 ROS的检测
            2.1.8 超氧阴离子的检测
            2.1.9 细胞线粒体中ROS的检测
            2.1.10 细胞转染
            2.1.11 数据统计分析
        2.2 结果
            2.2.1 YAP对鹿茸软骨细胞增殖的影响
            2.2.2 YAP对鹿茸软骨细胞细胞周期的影响
            2.2.3 YAP对鹿茸软骨细胞细胞周期蛋白及蛋白激酶表达的影响
            2.2.4 YAP对鹿茸软骨细胞分化的影响
            2.2.5 YAP对鹿茸软骨细胞中ROS的调控
                2.2.5.1 YAP对鹿茸软骨细胞中ROS含量的影响
                2.2.5.2 YAP对鹿茸软骨细胞中超氧阴离子含量的影响
                2.2.5.3 YAP对鹿茸软骨细胞中线粒体ROS、ATP及mtDNA的影响
                2.2.5.4 YAP对鹿茸软骨细胞中Nrf2-ARE通路的影响
                2.2.5.5 YAP对鹿茸软骨细胞中抗氧化剂的影响
            2.2.6 YAP介导ROS对鹿茸软骨细胞分化的影响
        2.3 讨论
结论
参考文献
附录
导师简介
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]燃油试验室内航空煤油蒸汽扩散的数值模拟[J]. 段安鹏.  科技视界. 2016(27)

博士论文
[1]ATRA在梅花鹿鹿茸软骨细胞分化过程中的作用及调控机理[D]. 张虹亮.吉林大学 2017

硕士论文
[1]IGF1R基因沉默对梅花鹿鹿茸软骨细胞增殖周期凋亡等作用研究[D]. 秦洋洋.华中农业大学 2015



本文编号：3199701