硒缺乏对鸡肝脏内源性硫化氢及其相关生成酶的影响
发布时间：2021-05-21 13:34
硒是人和动物体内一种重要的微量元素。日粮中硒缺乏会引发一系列疾病。肝脏是鸡硒缺乏时的一个靶器官。硫化氢（H2S）是近年来发现的继NO和CO后的第三类气体信号分子,参与了机体许多系统的生理活动。有研究表明内源性H2S具有保护肝脏及调节肝脏一些生理功能的作用。H2S在体内主要通过胱硫醚γ裂解酶（Cystathionine γ-lyase, CSE）、胱硫醚p合酶（Cystathionine β-synthase, CBS）和3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST）来合成。当发生疾病时,机体内源性H2S的含量以及相关酶的基因表达量会发生改变。但硒缺乏与内源性H2S的关系尚不清楚。本实验以鸡为试验动物,通过低硒日粮喂养鸡15、25、35、45、55、65d来建立模型,即对照组饲喂全价饲料,饲料硒含量为0.15mg/Kg低硒组饲喂低硒日粮,饲料硒含量为0.033mg/Kg。应用基因克隆技术在原核表达系统中表达了CSE并制备了多克隆抗体。研究了饲喂低硒日粮对鸡组织中H2S的含量以及促进H2S生成的相关基因（CSE、CBS、3-M...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
1.1 硒缺乏对肝脏的影响
1.1.1 缺硒与肝脏疾病
1.1.2 缺硒时肝脏的病理学变化
1.2 H_2S的生物学功能
1.2.1 内源性H_2S的生成途径
1.2.2 H_2S与疾病
1.2.3 H_2S的信号转导通路
1.2.4 H_2S含量的检测方法
1.3 目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验鸡的饲养
2.2 试验的主要试剂及仪器
2.2.1 主要仪器
2.2.2 主要试剂
2.3 肝组织中H_2S含量的检测
2.4 肝组织中CSE、CBS、3-MST基因mRNA表达的检测
2.4.1 引物的设计与合成
2.4.2 总RNA的提取
2.4.3 RNA反转录成cDNA
2.4.4 荧光定量PCR扩增
2.5 鸡CSE基因的克隆、原核表达、多克隆抗体的制备
2.5.1 鸡CSE基因序列的克隆与鉴定
2.5.2 鸡CSE基因在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定
2.5.3 抗鸡CSE多克隆抗体的制备
2.6 鸡CSE基因蛋白表达情况的检测
2.7 试验数据的分析与统计
3 结果与分析
3.1 鸡CSE多克隆抗体的制备
3.1.1 鸡CSE基因的PCR扩增结果
3.1.2 鸡CSE mRNA基因序列的测序结果
3.1.3 重组表达载体的构建与鉴定
3.1.4 融合蛋白的表达、鉴定与纯化
3.1.5 多克隆抗体的制备和鉴定结果
3.2 鸡肝脏H_2S含量的检测结果
3.3 鸡肝脏CSE、CBS、3-MST mRNA与CSE蛋白表达的检测结果
4 讨论
4.1 鸡CSE的克隆、表达及多克隆抗体的制备
4.2 硒缺乏对鸡肝脏中H_2S含量的影响
4.3 硒缺乏对鸡肝脏中CSE、CBS、3-MST mRNA和CSE蛋白表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]硫化氢在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化中的水平变化及其干预影响[J]. 赵德安,刘君,黄倩,韩子明. 中国当代儿科杂志. 2013(10)
[2]硫化氢对脂肪肝脂细胞脂联素分泌的调节[J]. 王新国,丁虹,黄利华,黄谦. 中华临床营养杂志. 2013 (04)
[3]硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶对肝细胞再生的影响[J]. 王新国,丁虹,刘惠敏,刘寿荣. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(15)
[4]慢性脑供血不足患者血清CBS、H2S水平变化及意义[J]. 郑永强,周发明,叶飞,刘南暖,邓晓玲. 湖北医药学院学报. 2013(03)
[5]硫化氢对肝硬化大鼠血液流变学的影响[J]. 谢潭,赵璇. 山东医药. 2013(22)
[6]H2S/CBS体系在大鼠癫痫发病中的变化及意义[J]. 韩晓伟,秦伟,陈远寿,罗孝美,潘贵书,刘晓红,段茂海. 中国现代医学杂志. 2012(26)
[7]硫化氢对大鼠肝纤维化的预防作用[J]. 沈钦海,秦召敏,逯爱梅. 中南大学学报(医学版). 2012(09)
[8]3-MST mRNA在大鼠延髓的表达以及急性缺氧对其基因表达的影响[J]. 聂政,李慧,侯雪飞,周华,唐玉红,陈丽,郑煜. 成都医学院学报. 2012(02)
[9]外源性硫化氢对大鼠肝纤维化的影响[J]. 沈钦海,秦召敏,于天贵,刘丽,郝丽娜. 第三军医大学学报. 2012(08)
[10]annexinA2基因片段的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 聂纪芹,汪龚泽,刘朝奇. 中国免疫学杂志. 2012(01)
硕士论文
[1]硫化氢对大鼠肝星状细胞胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达的影响[D]. 张进良.青海大学 2011
[2]硒对鸡肝脏SelW mRNA表达调控及缺硒诱导肝细胞凋亡的研究[D]. 孙博.东北农业大学 2011
[3]内源性CSE/H2S介导缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的拮抗作用[D]. 谢巍.南华大学 2008
本文编号：3199799
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：43 页
【学位级别】：硕士
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CONTENTS
摘要
Abstract
1 引言
1.1 硒缺乏对肝脏的影响
1.1.1 缺硒与肝脏疾病
1.1.2 缺硒时肝脏的病理学变化
1.2 H_2S的生物学功能
1.2.1 内源性H_2S的生成途径
1.2.2 H_2S与疾病
1.2.3 H_2S的信号转导通路
1.2.4 H_2S含量的检测方法
1.3 目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验鸡的饲养
2.2 试验的主要试剂及仪器
2.2.1 主要仪器
2.2.2 主要试剂
2.3 肝组织中H_2S含量的检测
2.4 肝组织中CSE、CBS、3-MST基因mRNA表达的检测
2.4.1 引物的设计与合成
2.4.2 总RNA的提取
2.4.3 RNA反转录成cDNA
2.4.4 荧光定量PCR扩增
2.5 鸡CSE基因的克隆、原核表达、多克隆抗体的制备
2.5.1 鸡CSE基因序列的克隆与鉴定
2.5.2 鸡CSE基因在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定
2.5.3 抗鸡CSE多克隆抗体的制备
2.6 鸡CSE基因蛋白表达情况的检测
2.7 试验数据的分析与统计
3 结果与分析
3.1 鸡CSE多克隆抗体的制备
3.1.1 鸡CSE基因的PCR扩增结果
3.1.2 鸡CSE mRNA基因序列的测序结果
3.1.3 重组表达载体的构建与鉴定
3.1.4 融合蛋白的表达、鉴定与纯化
3.1.5 多克隆抗体的制备和鉴定结果
3.2 鸡肝脏H_2S含量的检测结果
3.3 鸡肝脏CSE、CBS、3-MST mRNA与CSE蛋白表达的检测结果
4 讨论
4.1 鸡CSE的克隆、表达及多克隆抗体的制备
4.2 硒缺乏对鸡肝脏中H_2S含量的影响
4.3 硒缺乏对鸡肝脏中CSE、CBS、3-MST mRNA和CSE蛋白表达的影响
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]硫化氢在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化中的水平变化及其干预影响[J]. 赵德安,刘君,黄倩,韩子明. 中国当代儿科杂志. 2013(10)
[2]硫化氢对脂肪肝脂细胞脂联素分泌的调节[J]. 王新国,丁虹,黄利华,黄谦. 中华临床营养杂志. 2013 (04)
[3]硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶对肝细胞再生的影响[J]. 王新国,丁虹,刘惠敏,刘寿荣. 中华临床医师杂志(电子版). 2013(15)
[4]慢性脑供血不足患者血清CBS、H2S水平变化及意义[J]. 郑永强,周发明,叶飞,刘南暖,邓晓玲. 湖北医药学院学报. 2013(03)
[5]硫化氢对肝硬化大鼠血液流变学的影响[J]. 谢潭,赵璇. 山东医药. 2013(22)
[6]H2S/CBS体系在大鼠癫痫发病中的变化及意义[J]. 韩晓伟,秦伟,陈远寿,罗孝美,潘贵书,刘晓红,段茂海. 中国现代医学杂志. 2012(26)
[7]硫化氢对大鼠肝纤维化的预防作用[J]. 沈钦海,秦召敏,逯爱梅. 中南大学学报(医学版). 2012(09)
[8]3-MST mRNA在大鼠延髓的表达以及急性缺氧对其基因表达的影响[J]. 聂政,李慧,侯雪飞,周华,唐玉红,陈丽,郑煜. 成都医学院学报. 2012(02)
[9]外源性硫化氢对大鼠肝纤维化的影响[J]. 沈钦海,秦召敏,于天贵,刘丽,郝丽娜. 第三军医大学学报. 2012(08)
[10]annexinA2基因片段的克隆、表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 聂纪芹,汪龚泽,刘朝奇. 中国免疫学杂志. 2012(01)
硕士论文
[1]硫化氢对大鼠肝星状细胞胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达的影响[D]. 张进良.青海大学 2011
[2]硒对鸡肝脏SelW mRNA表达调控及缺硒诱导肝细胞凋亡的研究[D]. 孙博.东北农业大学 2011
[3]内源性CSE/H2S介导缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的拮抗作用[D]. 谢巍.南华大学 2008
本文编号：3199799
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