应用Cre/loxp系统构建含有BAC序列的重组伪狂犬病毒

发布时间：2021-05-22 04:43

　　近年来我国出现伪狂犬病毒变异株,导致猪伪狂犬病重新爆发流行。为研究伪狂犬病毒变异株毒力增强与抗原变异的分子机制,需要建立该病毒的感染性克隆操作系统。本研究通过构建转移载体pTEGGF,利用同源重组将含有增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）表达框及两翼各一个loxp位点,插入到伪狂犬病毒变异株PRV JS-2012 gG编码区下游,获得重组病毒rJS2012-gG/EGFP。将表达Cre重组酶的质粒pcDNA3.1-Cre转染BHK-21细胞,再感染rJS2012-gG/EGFP,筛选获得含有单一loxp位点的重组病毒rJS2012-gG/loxp。将rJS2012-gG/loxp基因组、含有EGFP标记基因的BAC载体p Belo BAC11-EGFP和pcDNA3.1-cre共转染BHK-21,获得含有BAC序列插入的重组病毒rJS2012-BAC。一步生长曲线与空斑试验显示,重组病毒rJS2012-BAC在体外生长略慢于亲本病毒。本研究成功构建了含有BAC载体的重组伪狂犬病毒,为进一步建立伪狂犬病毒变异株的感染性克隆操... 

【文章来源】：中国动物传染病学报. 2017,25(02)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 病毒和细胞
    1.2 质粒和菌株
    1.3 工具酶和主要试剂
    1.4 引物设计
    1.5 转移载体构建
        1.5.1 转移载体p TEGGF构建
        1.5.2 转移载体p Belo BAC11-EGFP构建
    1.6 重组病毒构建
        1.6.1 重组病毒r JS2012-g G/EGFP的构建
        1.6.2 重组病毒r JS2012-g G/loxp的构建
        1.6.3 重组病毒r JS2012-BAC的构建
    1.7 重组病毒一步生长曲线
    1.8 重组病毒空斑实验
2 结果
    2.1 转移载体构建及鉴定
    2.2 重组病毒筛选及纯化
    2.3 重组病毒一步生长曲线
    2.4 重组病毒空斑大小和形态
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定[J]. 童武,张青占,郑浩,刘飞,姜一峰,单同领,周艳君,童光志.  中国动物传染病学报. 2013(03)
[2]猪伪狂犬病毒浙江株感染性细菌人工染色体克隆的构建[J]. 尹文玲,尹龙勃,叶伟成,孙学强,姚火春,张淼涛,王一成,张存.  病毒学报. 2010(04)
[3]带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究[J]. 彭金美,王瑜,田志军,周艳君,陈瑾,安同庆,童光志.  中国预防兽医学报. 2009(01)
[4]细菌人工染色体及其在基因组学研究中的应用[J]. 张达.  生物技术通讯. 2003(05)
[5]Cre重组酶结构与功能的研究进展[J]. 王立霞,王勇,胡鸢雷,高音,林忠平.  生物工程学报. 2002(05)



本文编号：3201005