非Piezo依赖的小鼠显微授精新技术改良及其应用研究

发布时间：2021-05-22 05:08

　　小鼠的繁殖周期短,遗传信息丰富,其卵子、胚胎易于获得和培养,是进行ICSI研究的理想动物模型。但小鼠的Piezo-ICSI技术与人类卵子的ICSI技术在操作温度、破膜原理等方面存在较大差异,不能够很好地模拟人类卵子的ICSI操作。我们的前期研究通过改良显微持卵针建立了一种非Piezo依赖的小鼠ICSI技术（New-ICSI, N-ICSI）,在保证高存活率（83%）的前提下最大程度地贴近了人类的ICSI操作。然而该技术与Piezo-ICSI相比其卵子存活率和囊胚发育率还不是非常理想,尚待进一步的优化。本研究将原N-ICSI的穿刺破膜的操作分割成浅吸持浅穿刺和深吸持深穿刺两步后显著提高了该技术的卵子存活率（92.5%V.S.81.1%,p<0.01）,其操作效率也显著提高（18.9枚/小时V.S.15.6枚/小时,p<0.01）。本研究为小鼠非Piezo依赖的ICSI操作方法的应用和推广奠定了坚实基础,为人类ICSI技术安全性的动物模型研究（如精子弱激活力模型研究等）提供了更便捷高效的途径。在人类临床应用中有2%-3%的ICSI周期完全受精失败,其主要原因在于卵子未能被激活。... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略表
第一部分 文献综述
    ICSI技术的研究和应用
    1 ICSI技术的建立
    2 影响ICSI结果的因素
        2.1 卵子因素
        2.2 精子因素
        2.3 操作前的卵子、精子预处理
        2.4 操作后的卵子活化发生Ca~(2+)震荡的模式及辅助激活
        2.5 显微操作的条件
    3 小鼠ICSI技术的现状和存在的问题及其应用研究
        3.1 小鼠ICSI技术的现状和存在的问题
        3.2 小鼠ICSI技术应用于受精机理模型研究
    4 本研究的目的与意义
第二部分 实验研究
    第一章 实验材料及方法
        1 主要仪器设备
        2 常用耗材及试剂
            2.1 耗材
            2.2 常用试剂与溶液配制
        3 捡卵针制备和改良持卵针制作
            3.1 捡卵针的制备
            3.2 改良持卵针的制作
        4 实验动物
        5 卵子的准备
        6 精子的准备
        7 ICSI操作
            7.1 ICSI前准备工作
            7.2 ICSI操作
        8 胚胎培养与观察
        9 SCSA(Sperm Chromatin Structure Assay)
        10 统计分析
    第二章 非Piezo依赖的小鼠显微授精新技术的改良
        1 引言
        2 实验设计与结果
            2.1 两步法N-ICSI技术对卵子存活率及受精率的影响
            2.2 两步法N-ICSI技术对胚胎发育的影响
            2.3 N-ICSI与两步法N-ICSI操作效率的比较
        3 分析与讨论
    第三章 非Piezo依赖的小鼠显微授精新技术的应用
        1 引言
        2 实验设计及结果
            2.1 温度因素对脱尾后精子激活力的影响
            2.2 时间因素对脱尾后精子激活力和胚胎发育的影响
            2.3 辅助激活对37℃预孵的脱尾精子所得胚胎的受精和发育影响
            2.4 脱尾后于37℃预孵处理对精于DNA完整性的影响
        3 分析与讨论
总结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠卵子胞膜在显微穿刺中存活的膜特性因素研究[J]. 邓利,曾明,匡延平,邬玲仟,吕祁峰.  生殖与避孕. 2011(12)
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[3]卵胞浆内单精子注射中小鼠卵细胞第一极体位置和形态对受精率和受精卵质量的影响[J]. 彭弋峰,鲍时华,彭守静.  生殖医学杂志. 2004(02)
[4]水牛精子胞质内显微受精技术的初步研究[J]. 张艳玲,牛向丽,石德顺,卢克焕.  草食家畜. 2002(04)
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[7]小鼠卵细胞质内显微注入单精子受精的实验研究[J]. 杨益寿,熊素芳,龙文,李鸣,夏明珠,汪昌介.  解剖学报. 1998(04)
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博士论文
[1]水牛卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植的研究[D]. 杨素芳.广西大学 2002

硕士论文
[1]小鼠ICSI新技术及其用于提高人类辅助生殖技术的研究[D]. 曾明.南昌大学 2011
[2]小鼠ICSI技术改良及体外畸形孵化与囊胚内细胞团分裂风险关系的研究[D]. 邓利.中南大学 2010
[3]牛卵母细胞胞浆内单精子注射的研究[D]. 张营霞.中国农业科学院 2007



本文编号：3201040