干扰素-τ调节妊娠早期奶牛子宫内膜BoLA-Ⅰ机制研究

发布时间：2021-05-24 00:18

　　IFN-τ和BoLA-Ⅰ在奶牛妊娠早期提高母体子宫对胎儿的容受性,提供子宫内免疫抑制环境,在建立妊娠稳定着床等妊娠免疫问题上发挥了关键性作用。IFN-τ是反刍动物的特征性物质,又被定义为抗黄体溶解蛋白,在妊娠早期被胚胎滋养层细胞分泌。由于从IFN-τ出现到消失的时间非常短暂,所以有关IFN-τ在反刍动物妊娠早期的特异性调节功能还不是很清楚。主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类抗原在妊娠早期发挥着在胚胎植入时抑制免疫排斥的作用,在牛被命名为BoLA-Ⅰ。奶牛子宫对胎儿的容受性和Bo LA-Ⅰ密切相关。IFN-τ调节BoLA-Ⅰ的机制尚不明确,妊娠早期母体-胎儿界面的妊娠免疫问题需要研究。本研究确认了胚胎滋养层分泌的IFN-τ通过作用于子宫内膜腔上皮细胞表达Bo LA-Ⅰ,进而调节早期妊娠免疫的潜在机制,主要研究内容和实验结果如下:（1）为了研究妊娠早期的子宫内膜变化,我们选取妊娠早期9-20天内的三头奶牛子宫内膜组织进行组织学分析,结果显示怀孕早期奶牛子宫内膜组织明显增生变厚,且子宫内膜腔上皮之间的间隙增宽、血管增多,有利于胚胎对子宫内膜的侵袭与附着以及生长和发育;此际子宫内膜几乎没有中性... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写词表
第一章 文献综述
    1 研究背景——奶牛妊娠免疫
    2 IFN-τ——反刍动物的“hCG”
    3 BoLA-Ⅰ——牛的Ⅰ型主要组织相容性复合体
    4 妊娠相关转录因子及信号通路
    5 研究的目的意义
    6 研究的主要内容
第二章 妊娠早期奶牛子宫内膜组织检测
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料
            2.1.1 试验动物
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂及耗材
            2.1.4 主要溶液及培养基的配制
        2.2 试验方法
            2.2.1 样品的采集及预处理
            2.2.2 引物设计
            2.2.3 总RNA的提取与反转录
            2.2.4 RT-qPCR检测
            2.2.5 细胞蛋白的提取及Western Blot分析
            2.2.6 组织学检测
            2.2.8 数据处理分析
    3 结果与分析
        3.1 奶牛子宫内膜组织学变化
        3.2 奶牛子宫内膜组织IL-6 及IL-10 的表达变化
        3.3 奶牛子宫内膜组织IFN-τ 及Bo LA-Ⅰ的表达变化
        3.4 奶牛子宫内膜组织相关核转录因子的表达变化
    4 讨论
第三章 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的培养及鉴定
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料
            2.1.1 试验动物
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂及耗材
            2.1.4 主要溶液及培养基的配制
        2.2 试验方法
            2.2.1 样品的采集及预处理
            2.2.2 奶牛子宫内膜腔上皮细胞原代培养及传代
            2.2.3 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的纯化
            2.2.4 免疫组化检测
            2.2.5 激光共聚焦
    3 结果
        3.1 奶牛子宫内膜腔上皮细胞原代培养及传代
        3.2 奶牛子宫内膜腔上皮细胞免疫组织化学鉴定
        3.3 奶牛子宫内膜腔上皮细胞激光共聚焦鉴定。
    4 讨论
第四章 IFN-τ 对奶牛子宫内膜腔上皮细胞Bo LA-Ⅰ表达的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料
            2.1.1 实验细胞
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要试剂及耗材
            2.1.4 主要溶液及培养基的配制
        2.2 试验方法
            2.2.1 样品的采集及预处理
            2.2.2 引物设计
            2.2.3 总RNA的提取与反转录
            2.2.4 RT-qPCR检测
            2.2.5 细胞蛋白的提取及Western Blot分析
            2.2.6 ELISA检测
            2.2.7 数据处理分析
    3 结果
        3.1 IFN-τ 对奶牛子宫内膜腔上皮细胞IL-6 和IL-10 表达的影响
        3.2 IFN-τ 对奶牛子宫内膜腔上皮细胞BoLA-Ⅰ表达的影响
        3.3 IFN-τ 对奶牛子宫内膜腔上皮细胞妊娠相关转录因子的影响
    4 讨论
第五章 结论与展望
    1 结论
    2 展望
参考文献
发表文章
致谢



本文编号：3203225