Rab蛋白在卵母细胞减数分裂过程中的作用

发布时间：2021-05-24 00:11

　　卵母细胞是雌性生殖能力的核心,卵母细胞的生长发育是一个包括核成熟和胞质成熟相互协调的过程。纺锤体组装和染色体排列需要精密的调控,以保证卵母细胞减数分裂的有序进行,否则会导致非整倍体卵母细胞的产生,造成胚胎死亡或生出有缺陷的后代。因此,维持卵母细胞基因组的完整性和遗传稳定性具有重要的生物学意义。虽然已有各种不同的分子被发现与卵母细胞纺锤体、染色体缺陷有关,但调节减数分裂的通路和机制仍不十分明确。Rab蛋白是一类小GTP酶,广泛参与细胞内各种生理活动,但其在减数分裂过程中的作用鲜有报道,为了研究Rab家族蛋白Rab5a和Rab6a在减数分裂中的功能作用及通路,本研究以小鼠卵母细胞为材料,通过吗啉基低聚物（Phosphorodiamidate Morpholino Oligomer, PMO）和RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术,分别敲低Rab5a和Rab6a,并运用免疫荧光染色法及激光共聚焦技术来研究Rab5a和Rab6a在卵母细胞减数分裂过程中的作用,并探讨其作用机理。本研究共包括以下6个部分：试验一、Rab5a在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用本试验旨在通过... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号及缩略语
前言
第一部分 文献综述
    第一章 Rab蛋白与细胞分裂
        1 细胞分裂染色体排列与分离的调控
            1.1 动粒的主要结构与功能
            1.2 动粒-微管作用
            1.3 动粒及动粒相关蛋白
        2 Rab蛋白及其功能作用
            2.1 Rab蛋白的结构与分布
            2.2 Rab蛋白的循环与调节
            2.3 Rab的功能
        3 Rab与细胞分裂
            3.1 Rab与胞质分裂
            3.2 Rab与染色体分离和中板排列
    第二章 卵母细胞老化与Sirt1
        1 卵母细胞老化
            1.1 卵母细胞老化的特征及其对发育的影响
            1.2 卵母细胞老化的机理
            1.3 影响卵母细胞老化的因素
            1.4 卵母细胞老化控制机理及应用
        2 Sirt1的结构与功能
            2.1 Sirt1的结构、表达与定位
            2.2 Sirt1的功能与细胞寿命
            2.3 Sirt1的抑制剂和激活剂
第二部分 试验研究
    第三章 Rab5a在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用
        1 材料
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 试剂配制
        2 方法
            2.1 小鼠卵母细胞的采集及培养
            2.2 显微注射
            2.3 小鼠卵母细胞RNA的提取及逆转录
            2.4 PCR
            2.5 蛋白免疫印迹(western blot)
            2.6 免疫荧光染色
            2.7 核型分析
        3 结果
            3.1 Rab5a在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的分布变化
            3.2 Rab5a敲低效率检测及其对卵母细胞体外成熟的影响
            3.3 Rab5a对纺锤体和染色体的影响
            3.4 Rab5a对动粒-微管作用的影响
        4 讨论
        5 小结
    第四章 Rab5a影响减数分裂的信号通路探讨
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 试剂配方
        2 方法
            2.1 免疫荧光染色方法三
            2.2 Westen blot
        3 结果
            3.1 Rab5a对Lamin的影响
            3.2 Rab5a对NuMA的影响
            3.3 Rab5a对CENPF的影响
        4 讨论
        5 小结
    第五章 CENPF介导了Rab5a在减数分裂中的作用
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 主要试剂
        2 方法
        3 结果
            3.1 CENPF敲低效果检测
            3.2 CENPF对纺锤体和染色体的影响
            3.3 CENPF对动粒的影响
            3.4 CENPF和Rab5a共敲低效果检测
        4 讨论
        5 小结
    第六章 Rab6a在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的作用
        1 材料
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
        2 方法
            2.1 去透明带
            2.2 荧光定量PCR
        3 结果
            3.1 Rab6a在减数分裂过程中的定位
            3.2 Rab6a RNAi序列选择及敲低效果检测
            3.3 Rab6a对减数分裂进程的影响
            3.4 Rab6a对纺锤体和染色体的影响
        4 讨论
        5 小结
    第七章 Rab6a对卵母细胞成熟过程中细胞器的影响
        1 材料
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 试剂配制
        2 方法
            2.1 活细胞染色法
        3 结果
            3.1 Rab6a对CG的影响
            3.2 Rab6a对Golgi的影响
            3.3 Rab6a对ER的影响
        4 讨论
        5 小结
    第八章 猪卵母细胞老化的分子调控初探
        1 材料
            1.1 仪器
            1.2 试剂
            1.3 试剂配制
        2 方法
            2.1 猪卵母的采集和培养
            2.2 体外老化和白藜芦醇处理
            2.3 卵母细胞收集
            2.4 猪卵免疫荧光染色
            2.5 Mito Tracker免疫荧光染色
            2.6 Western blot
        3 结果
            3.1 Sirtl在卵母细胞老化过程中的表达变化
            3.2 白藜芦醇对卵母细胞老化过程中形态学变化的影响
            3.3 白藜芦醇处理对体外老化的猪卵母细胞染色体和纺锤体的影响
            3.4 白藜芦醇对体外老化的猪卵母细胞皮质颗粒分布的影响
            3.5 白藜芦醇对猪老化卵母细胞线粒体变化的影响
        4 讨论
        5 小结
全文结论
创新点
参考文献
附录：攻读博士期间论文发表情况
致谢



本文编号：3203216