禽β-防御素7和10抗三种病毒感染研究
发布时间：2021-05-24 05:54
J亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）、马立克氏病病毒（Marek’s disease virus,MDV）、猪圆环病毒病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV2）这三种病毒都可以引起被感染动物免疫抑制,造成动物机体免疫力下降,从而利于其它病原菌的入侵,引起两种或多种疾病的并发感染,增加了诊断和治疗的难度。目前MDV与PCV2主要通过接种疫苗来进行防控,虽然在一定程度上减少了疾病的发生,但同时也加剧了毒株的变异速度。ALV-J主要通过淘汰方式来进行净化,但2018年中国几个省份几乎同时爆发由ALV-J引起的髓细胞瘤病,使得ALV-J的净化之路愈发艰巨。而抗生素添加剂的使用严重破坏了动物肠道的微生态平衡,药物残留也影响了畜产品的品质和人类健康。因此,急需开发出一种无毒副作用又不会使病原菌产生耐药性的药物来解决这一问题。防御素具广谱抗微生物活性,能有效地杀灭病毒、细菌、真菌、螺旋体等病原微生物,对肿瘤细胞也有细胞毒作用,且迄今尚未发现有致病菌株对其产生耐药性。许多证据表明,防御素对囊膜病毒有显著抑制作用。β-防御素...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 抗菌肽简介
1.1.1 抗菌肽的定义
1.1.2 抗菌肽的分类
1.2 抗菌肽家族成员-防御素简介
1.2.1 防御素的定义
1.2.2 防御素的分类
1.2.3 防御素的生物学作用及机制
1.3 禽β-防御素的研究进展
1.3.1 禽β-防御素的结构特征及生物学特性
1.3.2 禽β-防御素的研究展望
1.4 ALV-J、MDV、PCV2 简介
1.4.1 ALV-J的病原学与致病性
1.4.2 MDV的病原学与致病性
1.4.3 PCV2 的病原学与致病性
1.5 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 病毒、载体、菌种、细胞和试验动物
2.1.2 试验试剂
2.1.3 主要试剂的配制
2.1.4 主要试验仪器
2.2 试验方法
2.2.1 AvBD10 目的基因的获取
2.2.1.1 AvBD10 蛋白引物设计与合成
2.2.1.2 组织总RNA的提取
2.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳获取目的片段
2.2.1.4 目的片段的回收
2.2.2 重组AvBD7和AvBD10 的原核表达
2.2.2.1 融合表达载体的构建
2.2.2.2 重组AvBD7和AvBD10 的诱导与表达
2.2.3 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的纯化与检验
2.2.3.1 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的纯化
2.2.3.2 蛋白浓度的测定
2.2.3.3 SDS-PAGE和 western blot检验蛋白纯化结果
2.2.4 重组AvBD7和AvBD10 蛋白的体外抗病毒试验
2.2.4.1 重组AvBD7和AvBD10 蛋白对细胞活性的影响
2.2.4.2 qPCR检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
2.2.4.3 Western blot检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
2.2.5 AvBD7和Av BD10 蛋白体内抗MDV试验
2.2.5.1 体内抗病毒试验设计
2.2.5.2 大体剖检病变观察
2.2.5.3 血涂片观察
2.2.5.4 组织病理学观察
3 结果与分析
3.1 目的基因的获取
3.1.1 设计引物提取目的基因
3.1.2 重组质粒鉴定及序列对比
3.2 AvBD7和AvBD10 蛋白原核表达
3.2.1 原核表达载体构建
3.2.2 AvBD7和Av BD10 蛋白的诱导表达
3.2.3 纯化AvBD7和AvBD10 蛋白的浓度测定
3.2.4 纯化AvBD7和AvBD10 蛋白的SDS-PAGE和western blot检测
3.3 AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒试验
3.3.1 AvBD7和AvBD10蛋白对细胞的毒性检测
3.3.2 qPCR检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
3.3.3 Western blot检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
3.4 AvBD7和AvBD10 蛋白体内抗MDV试验
3.4.1 大体剖检病变观察
3.4.2 血涂片观察
3.4.3 组织病理学观察
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗菌肽生物活性及其作用机理研究进展[J]. 王为栋,孙海娟. 当代畜牧. 2018(33)
[2]抗菌肽的研究进展[J]. 李翠玲,刘勇. 岭南急诊医学杂志. 2018(05)
[3]近年来ALV-J的国内外研究进展[J]. 徐晴晴,王峰,孙培,王文秀. 中国兽医学报. 2018(09)
[4]鸡马立克氏病的流行特点、临床症状、鉴别和防控[J]. 肖秋红. 现代畜牧科技. 2018(08)
[5]抗菌肽研究进展及应用[J]. 甄阳光. 饲料博览. 2018(07)
[6]抗菌肽及类抗菌肽的设计、合成及应用[J]. 周欣宇,周春才. 化学进展. 2018(07)
[7]猪圆环病毒2型的研究进展[J]. 沈强. 兽医导刊. 2018(13)
[8]抗菌肽与类抗菌肽研究[J]. 孙榕壑. 当代化工研究. 2018(05)
[9]抗菌肽抗细菌机理研究进展[J]. 单安山,田昊天,邵长轩,谭鹏,来振衡. 东北农业大学学报. 2018(03)
[10]抗菌肽的作用机理及应用[J]. 王亚平,余维维,秦梦茹,杨勇,金德俊,饶犇. 湖北农业科学. 2018(05)
本文编号：3203672
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 抗菌肽简介
1.1.1 抗菌肽的定义
1.1.2 抗菌肽的分类
1.2 抗菌肽家族成员-防御素简介
1.2.1 防御素的定义
1.2.2 防御素的分类
1.2.3 防御素的生物学作用及机制
1.3 禽β-防御素的研究进展
1.3.1 禽β-防御素的结构特征及生物学特性
1.3.2 禽β-防御素的研究展望
1.4 ALV-J、MDV、PCV2 简介
1.4.1 ALV-J的病原学与致病性
1.4.2 MDV的病原学与致病性
1.4.3 PCV2 的病原学与致病性
1.5 研究目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 病毒、载体、菌种、细胞和试验动物
2.1.2 试验试剂
2.1.3 主要试剂的配制
2.1.4 主要试验仪器
2.2 试验方法
2.2.1 AvBD10 目的基因的获取
2.2.1.1 AvBD10 蛋白引物设计与合成
2.2.1.2 组织总RNA的提取
2.2.1.3 琼脂糖凝胶电泳获取目的片段
2.2.1.4 目的片段的回收
2.2.2 重组AvBD7和AvBD10 的原核表达
2.2.2.1 融合表达载体的构建
2.2.2.2 重组AvBD7和AvBD10 的诱导与表达
2.2.3 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的纯化与检验
2.2.3.1 AvBD7 蛋白和AvBD10 蛋白的纯化
2.2.3.2 蛋白浓度的测定
2.2.3.3 SDS-PAGE和 western blot检验蛋白纯化结果
2.2.4 重组AvBD7和AvBD10 蛋白的体外抗病毒试验
2.2.4.1 重组AvBD7和AvBD10 蛋白对细胞活性的影响
2.2.4.2 qPCR检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
2.2.4.3 Western blot检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
2.2.5 AvBD7和Av BD10 蛋白体内抗MDV试验
2.2.5.1 体内抗病毒试验设计
2.2.5.2 大体剖检病变观察
2.2.5.3 血涂片观察
2.2.5.4 组织病理学观察
3 结果与分析
3.1 目的基因的获取
3.1.1 设计引物提取目的基因
3.1.2 重组质粒鉴定及序列对比
3.2 AvBD7和AvBD10 蛋白原核表达
3.2.1 原核表达载体构建
3.2.2 AvBD7和Av BD10 蛋白的诱导表达
3.2.3 纯化AvBD7和AvBD10 蛋白的浓度测定
3.2.4 纯化AvBD7和AvBD10 蛋白的SDS-PAGE和western blot检测
3.3 AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒试验
3.3.1 AvBD7和AvBD10蛋白对细胞的毒性检测
3.3.2 qPCR检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
3.3.3 Western blot检测AvBD7和AvBD10 蛋白体外抗病毒效果
3.4 AvBD7和AvBD10 蛋白体内抗MDV试验
3.4.1 大体剖检病变观察
3.4.2 血涂片观察
3.4.3 组织病理学观察
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]抗菌肽生物活性及其作用机理研究进展[J]. 王为栋,孙海娟. 当代畜牧. 2018(33)
[2]抗菌肽的研究进展[J]. 李翠玲,刘勇. 岭南急诊医学杂志. 2018(05)
[3]近年来ALV-J的国内外研究进展[J]. 徐晴晴,王峰,孙培,王文秀. 中国兽医学报. 2018(09)
[4]鸡马立克氏病的流行特点、临床症状、鉴别和防控[J]. 肖秋红. 现代畜牧科技. 2018(08)
[5]抗菌肽研究进展及应用[J]. 甄阳光. 饲料博览. 2018(07)
[6]抗菌肽及类抗菌肽的设计、合成及应用[J]. 周欣宇,周春才. 化学进展. 2018(07)
[7]猪圆环病毒2型的研究进展[J]. 沈强. 兽医导刊. 2018(13)
[8]抗菌肽与类抗菌肽研究[J]. 孙榕壑. 当代化工研究. 2018(05)
[9]抗菌肽抗细菌机理研究进展[J]. 单安山,田昊天,邵长轩,谭鹏,来振衡. 东北农业大学学报. 2018(03)
[10]抗菌肽的作用机理及应用[J]. 王亚平,余维维,秦梦茹,杨勇,金德俊,饶犇. 湖北农业科学. 2018(05)
本文编号：3203672
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