鸭TLR21的分子克

发布时间：2021-05-24 05:59

　　Toll样受体（Toll-like receptors,TLR）是多细胞生物体内参与固有免疫的一类重要模式识别受体,联系着生物体的非特异性免疫和特异性免疫功能。本研究首次克隆并报道了含有鸭TLR21基因完整编码框的cDNA序列,并进行了相关研究。主要内容如下:1鸭TLR21基因的分子克隆、序列分析及组织表达谱检测利用PCR和RACE技术,根据禽类TLR21基因序列设计引物,成功克隆了鸭TLR21基因,并将此长为3009 bp的cDNA序列提交至NCBI（GenBank登录号:KY829021）。鸭TLR21基因序列包含一个长为2931 bp的开放阅读框,编码976个氨基酸,氨基酸序列对比显示与鹅TLR21相似度最高,达92%;其次是鸡TLR21,相似度为76%;鸭TLR21与鳄鱼和蝾螈的TLR21氨基酸序列相似度高于鱼类TLR21;与人TLR9相似度仅为28%。预测的鸭TLR21二级结构显示其具有典型的TLR结构,包括信号肽、胞外区、跨膜区和胞内区;三级结构预测结果显示鸭TLR21或以单体形式存在,或以受体-配体的对称二聚体形式存在。鸭TLR21的组织分布规律显示鸭TLR21广泛存在于... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1 TLR21基因的研究进展
        1.1 TLR21的结构
        1.2 TLR21在禽类体内的分布
        1.3 TLR21的功能
    2 本试验的研究目的及意义
第二章 鸭TLR21基因的克隆、序列分析及组织表达谱
    1 试验材料
        1.1 试验动物
        1.2 菌种与质粒
        1.3 主要试验仪器和设备
        1.4 主要试验试剂
        1.5 相关溶液配制
    2 试验方法
        2.1 鸭TLR21部分cDNA片段的扩增
        2.2 目的基因的TA克隆与测序
        2.3 鸭TLR21的cDNA全长扩增
        2.4 鸭TLR21基因的序列分析
        2.5 鸭TLR21的组织表达谱
    3 试验结果
        3.1 鸭TLR21的cDNA序列
        3.2 鸭TLR21的核酸及氨基酸序列分析
        3.3 鸭TLR21氨基酸多序列对比及进化树构建
        3.4 鸭与其他动物TLR21蛋白质二级结构的比对分析
        3.5 鸭TLR21三级结构的预测
        3.6 鸭TLR21的组织表达谱
    4 讨论
    5 本章小结
第三章 鸭TLR21的免疫学活性检测
    1 试验材料
        1.1 试验动物及毒株
        1.2 主要试验仪器和设备
        1.3 主要试验试剂
    2 试验方法
        2.1 鸭胚成纤维细胞模型的建立
        2.2 病毒感染雏鸭模型的建立
        2.3 病毒或刺激剂处理后细胞(组织)的免疫应答情况检测
        2.4 过表达TLR21及双荧光素酶NF-κB报告基因活性检测
        2.5 靶向鸭TLR21基因的干扰RNA试验
        2.6 TLR21对DPV在DEFs中复制的影响
    3 试验结果
        3.1 过表达TLR21及双荧光素酶NF-κB报告基因活性检测
        3.2 刺激剂处理后DEFs免疫应答的检测
        3.3 靶向鸭TLR21基因的干扰RNA试验结果
        3.4 病毒感染鸭胚成纤维细胞后相关细胞因子检测结果
        3.5 雏鸭感染病毒后其脾脏和法氏囊中相关细胞因子检测结果
        3.6 TLR21对DPV在DEFs中复制的影响
    4 讨论
    5 本章小结
结论
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭胚成纤维细胞培养、传代及保存方法的研究[J]. 许静,李进军,熊胜,陈黎,杨倩,卢立志.  中国家禽. 2012(13)
[2]禽类Toll样受体的分子进化与作用机制研究进展[J]. 陈浩,杨庆利,韦平.  中国家禽. 2010(16)
[3]CpG序列的免疫激活机理及应用[J]. 陆军,严维耀,郑兆鑫.  生物技术通报. 1999(05)

博士论文
[1]鸭、鹅PRRs的克隆、分析及分布研究[D]. WAEL M.K.ELFEIL （维尔）.吉林大学 2012



本文编号：3203679