PCV2的分子流行病学分析及PCV2嵌合重组病毒的制备

发布时间：2021-05-25 18:03

　　猪圆环病毒2型（porcine circovirus2, PCV2）是无囊膜的小单链环形DNA病毒,其大小约为1.8kb,属于圆环病毒科、圆环病毒属。根据PCV2序列分析显示,PCV2可以分为3个主要的基因型（PCV2a、PCV2b和PCV2c）。PCV2a可以进一步分为六个亚型（2A至2F）；PCV2b又可以分为三个亚型（1A1B和1C）。该病毒能引起PCV2相关疾病（porcine circovirus type2-associated diseases, PCVAD）,临床症状为全身感染、肺炎、肠炎、繁殖障碍与猪皮炎和肾病综合症及断奶仔猪多系统消耗综合征等症状。PCV2已经对包括我国在内的世界各国养猪业造成了严重的经济损失。猪细环病毒（Torque teno sus virus, TTSuV）包含一个单链、环形、无囊膜的DNA,其基因组大小为2.8kb,为指环病毒亚科,细环病毒属,TTSuV主要包括TTSuVl和TTSuV2。TTSuV1和TTSuV2都有较高的流行率,并且在临床患病动物中的发生率要高,与PCVAD和PCV2有明显联系。为了解2012年我国部分地区临床患病猪和健康... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 PCV2的分子特征
    1.2 PCV2和其它猪源病毒的混合感染
        1.2.1 猪细环病毒
        1.2.2 猪细小病毒
        1.2.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒
        1.2.4 猪流行性腹泻病毒
        1.2.5 猪流感病毒
        1.2.6 猪圆环病毒Ⅰ型
        1.2.7 猪博卡样病毒
    1.3 PCV2的自然重组
    1.4 PCV2与免疫之间的关系
        1.4.1 PCV2感染与先天性免疫的关系
        1.4.2 PCV2核酸的免疫调节作用
        1.4.3 PCV2的免疫平衡机制
        1.4.4 PCV2感染与体液免疫应答的关系
        1.4.5 PCV2感染与细胞免疫反应的关系
    1.5 研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 样品的采集
        2.1.2 实验动物、细胞和菌株
        2.1.3 常用的生化试剂
        2.1.4 主要的仪器设备
    2.2 PCV2感染的分子流行病学调查
        2.2.1 样品总DNA的提取
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 PCR的扩增
        2.2.4 PCV2 ORF2的克隆
        2.2.5 PCV-2的序列分析
    2.3 PCV2分离株的基因型分析
        2.3.1 引物设计
        2.3.2 全基因组的PCR扩增
        2.3.3 全基因组的克隆
        2.3.4 基因型分析
        2.3.5 PCV2分离株的重组分析
    2.4 PCV2嵌合病毒的建立
        2.4.1 引物设计
        2.4.2 PCV嵌合株感染性克隆的构建
        2.4.3 PCV嵌合感染性克隆的转染
        2.4.4 嵌合重组病毒的连续传代
        2.4.5 嵌合重组病毒的PCR检测
        2.4.6 间接免疫荧光(IFA)检测
        2.4.7 嵌合重组病毒TCID50的测定
        2.4.8 嵌合重组PCV的小鼠接种实验
3 结果
    3.1 PCV2与TTSUV混合感染的分子流行病学调查分析
        3.1.1 PCV2感染的检测结果
        3.1.2 PCV2 ORF2基因的序列同源性分析
    3.2 现地PCV2分离株全基因组的克隆与序列分析
        3.2.1 现地PCV2分离株的全基因组的扩增、克隆及鉴定
        3.2.2 Cap基因的聚类分析结果
        3.2.3 Rep基因的聚类分析结果
        3.2.4 AHF13、AHF14和AHF9的全基因组序列分析
        3.2.5 AHF13、AHF14和AHF9的重组分析结果
    3.3 PCV嵌合病毒的建立
        3.3.1 重组pcDNA-PCV1-2、pcDNA-PCV2-1和pcNA-PCV2的鉴定
        3.3.2 感染性嵌合克隆株的RT-PCR检测
        3.3.3 嵌合病毒复制动力学的病毒TCID50的测定
        3.3.4 嵌合病毒体外稳定性的检测
        3.3.5 嵌合病毒体内组织学分布的检测
        3.3.6 嵌合病毒体内稳定性的检测
        3.3.7 特异性抗体的检测
4 讨论
    4.1 PCV2感染的调查
    4.2 PCV2的自然重组
    4.3 PCV嵌合病毒的建立
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]一株新基因型猪圆环病毒Ⅱ型的鉴定[J]. 谢俊岭,陈晓平,孟凡伟,王保有,周双海,王志军.  中国农学通报. 2013(11)
[2]猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒病混合感染的诊断与防治方法[J]. 陈金山,韩庆功,马金友,董永军,李任峰,吴玉苹,陈俊杰,杨雪峰.  湖北农业科学. 2013(01)
[3]猪圆环病毒2型疫苗研究进展[J]. 徐磊,宁蓬勃,郭抗抗,董平,董福军,张彦明.  动物医学进展. 2012(10)
[4]猪圆环病毒2型与猪细小病毒共感染对猪肺泡巨噬细胞吞噬功能及其干扰素表达水平的影响[J]. 刘祥义,陈立功,宋勤叶,杨芳,李艳琴,左玉柱,焦健达,王秀平.  微生物学报. 2011(01)
[5]猪圆环病毒Ⅱ型和巨噬细胞对体外培养仔猪淋巴细胞白介素-6和白介素-10及其受体表达的影响[J]. 陈耿,华利忠,张书霞.  江苏农业学报. 2010(05)
[6]猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及应用[J]. 郑玉姝,赵朴,刘俊伟,陈金山,姚四新,赵坤,李任峰,王三虎,刘兴友,张智勇.  中国畜牧兽医. 2010(08)
[7]猪圆环病毒2型河北分离株的基因型鉴定及其毒力分析[J]. 宋勤叶,马增军,李潭清,马兴树.  中国兽医杂志. 2008(09)
[8]嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性[J]. 宋益,朱丽娜,高崧,刘秀梵.  微生物学报. 2008(09)



本文编号：3205775