基于iTRAQ/LC-MS/MS技术的低血钙症奶牛血浆蛋白组学轮廓分析
发布时间：2021-06-01 07:00
背景：奶牛低血钙症是一种以钙代谢负平衡为主的代谢病，常发生于奶牛围产期。它被分为临床型低血钙症即奶牛乳热（Milk Fever），以及亚临床型低血钙症（SubclinicalHypocalcemia）。由于钙稳态调节机制受多种因素影响，以往单纯地只针对某种病因或某种因素的单一研究，无法从整体角度了解其发病机理，因此本研究应用相对和绝对定量的等量异位标签（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）定量蛋白组学技术筛选和鉴定奶牛低血钙症发生过程中有价值的潜在的差异表达蛋白，探讨它们在奶牛低血钙发生过程中的作用，这对丰富和发展该病病因学理论具有重要的意义。目的：应用iTRAQ联合多维液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术筛选和鉴定健康奶牛、乳热奶牛以及亚临床低血钙症奶牛之间的血浆差异表达蛋白，探究这些蛋白在低血钙症发生过程中所起的作用。方法：实验动物被分为奶牛乳热组（MF）、亚临床低血钙症组（SH）和对照组（C），每组10头奶牛。同组内，每五个奶牛血浆（EDTA抗凝）样品等量混合为一组，去除高丰度蛋白和经胰酶消化为...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
iTRAQ试剂结构图
基团结合后总质荷比均为 145，因此平衡基团也有 4 种分子量，分别为 31-28 与报告基相应；肽反应基团的作用是把 iTRAQ 标签与肽 N 端和每个赖氨酸侧链连接，几乎能将本中所有酶解后肽段全部标记，而且被标记蛋白的一些重要结构信息不会受到影响[43]。图 1.1 iTRAQ 试剂结构图Figure1.1 Structure of iTRAQ Reagents
图 2.1 去除高丰度蛋白的 SDS-PAGE 电泳图-dimensional electrophoresis for depletion of plasma high abunda蛋白是为了更加突出可能存在的低丰度蛋白的生物标志物，除，应用 SDS-PAGE 对样品进行凝胶分析，结果见图 2.1。电泳的结果显示去除血浆高峰度蛋白后条带清晰锐利，没有质鉴定结果白在重复实验中重叠性的分析结果roteome Discoverer 1.3 软件矫正处理质谱分析得到的数据，同t Daemon 2.3.02 对数据库 NCBI-Bovine_refseq（71248 sequenc设定为 95%，且每个被鉴定的蛋白至少含有两个肽段。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国奶业进入严冬面临严峻考验（上）——奶业发展形势分析报告[J]. 王丁棉. 食品工业科技. 2015(03)
[2]2014年中国奶业回顾与展望[J]. 李胜利,曹志军,刘玉满,夏建民,王雅晶,杨敦启,姚琨,都文,翟瑞娜,康逍桐. 中国畜牧杂志. 2015(02)
[3]奶牛生产瘫痪的防治[J]. 邓祝新,刘德玉,李芳芳,王英群,李美珍,许春荣,彭夏云,吴柱月. 上海畜牧兽医通讯. 2014(05)
[4]围产期奶牛低血钙症的发生及预防措施研究[J]. 王宝杰,蔡兰芬. 北京农业. 2014(24)
[5]基于iTRAQ技术的蛋白质组学研究[J]. 桑石磊,李丽. 农技服务. 2014(06)
[6]应用iTRAQ-HPLC-MS技术筛选奶牛脂肪肝病尿液蛋白标志物[J]. 孙雨航,夏成,舒适,孙玲伟,徐闯. 畜牧兽医学报. 2014(05)
[7]14-3-3蛋白在心血管疾病中的作用及其分子机制研究进展[J]. 于娟,祈建勇. 广东医学. 2014(09)
[8]α2巨球蛋白的应用研究进展[J]. 晏鹤,张俊平,张川,胡振林. 生命的化学. 2014(02)
[9]胰岛素样生长因子结合蛋白-2基因研究进展[J]. 赵秀华. 中国家禽. 2014(05)
[10]我国奶牛养殖业成本收益分析及建议[J]. 魏秀芬,李良,张巧利. 中国奶牛. 2014(Z1)
博士论文
[1]日粮锰源和水平对产蛋鸡蛋壳品质的影响及其机理[D]. 肖俊峰.中国农业科学院 2014
[2]基于iTRAQ技术的结直肠癌蛋白标志物鉴定[D]. 褚光辉.第二军医大学 2013
硕士论文
[1]奶牛A2M转录调控分子机制及其功能性分子标记筛选[D]. 王秀革.山东师范大学 2013
[2]肝脏脂蛋白酯酶LPL的代谢调节功能与机制研究[D]. 徐俊楠.第二军医大学 2013
[3]基于iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选结直肠癌相关糖蛋白[D]. 张瑜.中南大学 2013
[4]奶牛乳热血浆差异表达蛋白的分离鉴定及其生物信息学分析[D]. 舒适.黑龙江八一农垦大学 2013
[5]iTRAQ及非标定量方法分析百合纲类植物叶绿体差异蛋白[D]. 陈洁.复旦大学 2012
[6]乳热奶牛血浆差异表达蛋白的分离与鉴定[D]. 杨龙蛟.黑龙江八一农垦大学 2010
[7]补体调节蛋白H因子及其相关蛋白的表达与膀胱移行细胞癌TUR术后复发的相关性分析[D]. 张剑.四川大学 2005
本文编号：3209897
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
iTRAQ试剂结构图
基团结合后总质荷比均为 145，因此平衡基团也有 4 种分子量，分别为 31-28 与报告基相应；肽反应基团的作用是把 iTRAQ 标签与肽 N 端和每个赖氨酸侧链连接，几乎能将本中所有酶解后肽段全部标记，而且被标记蛋白的一些重要结构信息不会受到影响[43]。图 1.1 iTRAQ 试剂结构图Figure1.1 Structure of iTRAQ Reagents
图 2.1 去除高丰度蛋白的 SDS-PAGE 电泳图-dimensional electrophoresis for depletion of plasma high abunda蛋白是为了更加突出可能存在的低丰度蛋白的生物标志物，除，应用 SDS-PAGE 对样品进行凝胶分析，结果见图 2.1。电泳的结果显示去除血浆高峰度蛋白后条带清晰锐利，没有质鉴定结果白在重复实验中重叠性的分析结果roteome Discoverer 1.3 软件矫正处理质谱分析得到的数据，同t Daemon 2.3.02 对数据库 NCBI-Bovine_refseq（71248 sequenc设定为 95%，且每个被鉴定的蛋白至少含有两个肽段。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国奶业进入严冬面临严峻考验（上）——奶业发展形势分析报告[J]. 王丁棉. 食品工业科技. 2015(03)
[2]2014年中国奶业回顾与展望[J]. 李胜利,曹志军,刘玉满,夏建民,王雅晶,杨敦启,姚琨,都文,翟瑞娜,康逍桐. 中国畜牧杂志. 2015(02)
[3]奶牛生产瘫痪的防治[J]. 邓祝新,刘德玉,李芳芳,王英群,李美珍,许春荣,彭夏云,吴柱月. 上海畜牧兽医通讯. 2014(05)
[4]围产期奶牛低血钙症的发生及预防措施研究[J]. 王宝杰,蔡兰芬. 北京农业. 2014(24)
[5]基于iTRAQ技术的蛋白质组学研究[J]. 桑石磊,李丽. 农技服务. 2014(06)
[6]应用iTRAQ-HPLC-MS技术筛选奶牛脂肪肝病尿液蛋白标志物[J]. 孙雨航,夏成,舒适,孙玲伟,徐闯. 畜牧兽医学报. 2014(05)
[7]14-3-3蛋白在心血管疾病中的作用及其分子机制研究进展[J]. 于娟,祈建勇. 广东医学. 2014(09)
[8]α2巨球蛋白的应用研究进展[J]. 晏鹤,张俊平,张川,胡振林. 生命的化学. 2014(02)
[9]胰岛素样生长因子结合蛋白-2基因研究进展[J]. 赵秀华. 中国家禽. 2014(05)
[10]我国奶牛养殖业成本收益分析及建议[J]. 魏秀芬,李良,张巧利. 中国奶牛. 2014(Z1)
博士论文
[1]日粮锰源和水平对产蛋鸡蛋壳品质的影响及其机理[D]. 肖俊峰.中国农业科学院 2014
[2]基于iTRAQ技术的结直肠癌蛋白标志物鉴定[D]. 褚光辉.第二军医大学 2013
硕士论文
[1]奶牛A2M转录调控分子机制及其功能性分子标记筛选[D]. 王秀革.山东师范大学 2013
[2]肝脏脂蛋白酯酶LPL的代谢调节功能与机制研究[D]. 徐俊楠.第二军医大学 2013
[3]基于iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选结直肠癌相关糖蛋白[D]. 张瑜.中南大学 2013
[4]奶牛乳热血浆差异表达蛋白的分离鉴定及其生物信息学分析[D]. 舒适.黑龙江八一农垦大学 2013
[5]iTRAQ及非标定量方法分析百合纲类植物叶绿体差异蛋白[D]. 陈洁.复旦大学 2012
[6]乳热奶牛血浆差异表达蛋白的分离与鉴定[D]. 杨龙蛟.黑龙江八一农垦大学 2010
[7]补体调节蛋白H因子及其相关蛋白的表达与膀胱移行细胞癌TUR术后复发的相关性分析[D]. 张剑.四川大学 2005
本文编号：3209897
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