鼠伤寒沙门菌SseB和SseL蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备

发布时间：2021-06-01 07:01

　　为制备鼠伤寒沙门菌SseB和SseL蛋白的特异性多克隆抗体（多抗）,以鼠伤寒沙门菌S025为供体菌,PCR扩增sseB和sseL基因,插入原核表达载体pGEX-6P-1,转化BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达,获得纯化蛋白免疫小鼠制备多抗;使用λ-red同源重组方法构建sseB和sseL基因缺失株;通过野生株和缺失株的Western-blot分析验证制备血清的特异性。结果显示:成功构建出重组质粒pGEX-6P-1-sseB和pGEX-6P-1-sseL,转化感受态细胞后,在IPTG 1 mmol/L、温度28℃、转速为220 r/min、诱导时间12 h的条件下,SseB和SseL蛋白呈可溶性表达;纯化蛋白免疫小鼠制备了多抗,Western-blot分析显示该多抗可特异性检测鼠伤寒沙门菌中的SseB和SseL蛋白。这两种蛋白多抗的获得为进一步研究其功能奠定基础。 

【文章来源】：中国家禽. 2020,42(06)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

目的基因的PCR扩增结果

重组质粒经Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切，均出现4 984 bp的p GEX-6P-1的载体条带以及591 bp的sseB、954 bp的sseL的目的片段条带（见图2），分子量大小与预期相符，测序结果也与预期相符，证明重组质粒构建成功。2.3 目的蛋白的诱导表达

诱导表达的蛋白经SDS-PAGE，结果与未诱导菌相比，含GST标签蛋白的pGEX-6P-1-sseB、pGEX-6P-1-sseL重组菌和含空载体细菌经过诱导表达后分别在约48 ku、61 ku和26 ku有特异性目的蛋白条带（见图3）。2.4 重组蛋白的可溶性分析

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3209898