牛产气荚膜梭菌α-ε融合基因的构建、表达及免疫原性研究
发布时间：2021-06-02 16:51
牛产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,Cl.perfringens）引起的疾病以A型多发，被认为是“牛猝死症”（Sudden Death Syndrome，SDS）的主要病原。近年来多见D型菌导致牛肠毒血症（Bovine enterotoxemia）的报道，因该病发病急、病程短、死亡率高，给我国畜牧业造成了巨大的经济损失。A型和D型产气荚膜梭菌主要产生α毒素和ε毒素。研究表明这两种毒素均为产气荚膜梭菌的主要免疫原，可刺激动物机体产生特异性的保护性抗体。本研究拟通过大肠杆菌克隆并表达出具有一定生物学活性的α毒素蛋白、ε毒素蛋白以及α-ε融合蛋白。首先，PCR分别扩增出A型产气荚膜梭菌的α毒素基因和D型产气荚膜梭菌的ε毒素基因，将两基因分别插入到pET-28a质粒中。与此同时，利用相同酶切位点连接的方法构建含有α-ε融合基因的重组pET-28a质粒。所有构建好的重组质粒经酶切和测序鉴定正确后，分别转化入BL21（DE3）PlysS中，IPTG诱导，用SDS-PAGE和Western blotting检测表达蛋白。采用镍柱亲和层析的方法纯化蛋白，制备成疫苗进行小鼠免...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
α毒素和ε毒素基因片段PCR产物的电泳分析结果
.2 pMD18-T-α 和 pMD18-T-ε 质粒的 PCR 和双酶切鉴质粒 M：DNA Marker 5 000；1：PCR 产物，925 bp；EcoRⅠ和 XolⅠ双酶切产物粒 M：DNA Marker 5 000；1：阴性对照；2：SacⅠ和3：PCR 产物，981 bpfication of the recombinant pMD18-T-α and pMD18-T-ε pldouble endonucleases digested-T-α plasmid M: DNA Marker 5 000;1: Product of PCR prcontrol ;3: Product of EcoRⅠand XolⅠdouble endonucleaT-ε plasmid M: DNA Marker 5 000;1: Negative control ; 2 XolⅠdouble endonucleases digested;3: Product of PCR, 9ε 毒素基因的序列分析结果18-T-α 和 pMD18-T-ε 质粒的 E.coli DH5α 甘油菌送上进行测序，测序结果用 DNAStar 软件处理之后与 GeneBA B
质粒pET28a-α的PCR及双酶切鉴定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]产气荚膜梭菌ι毒素研究进展[J]. 王琳,赵宇亮,何建龙,霍萍萍,张聪敏,赵宝华. 动物医学进展. 2013(11)
[2]D型产气荚膜梭菌ε毒素研究进展[J]. 高洁,张聪敏,刘伟,赵宇亮,赵宝华. 动物医学进展. 2013(10)
[3]不同动物魏氏梭菌病的探讨[J]. 王阳,管同恒,李超. 山东畜牧兽医. 2013(02)
[4]产气荚膜梭菌次要毒力因子的研究进展[J]. 田冬青,蒋玉文,杨京岚,陈小云,孙晔. 畜牧与饲料科学. 2010(10)
[5]产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备[J]. 田冬青,彭小兵,蒋玉文,杨京岚,陈小云,丁家波,屠伟英. 中国兽医学报. 2010(03)
[6]魏氏梭菌引起牛猝死的诊断报告[J]. 孙力,周相华,宫汝娥,艾玉芹,李瑞红. 中国奶牛. 2007(08)
[7]产气荚膜梭菌肠毒素的分子生物学研究进展[J]. 赵立峰. 动物医学进展. 2007(S1)
[8]Cloning of α-β fusion gene from Clostridium perfringens and its expression[J]. Jia-Ning Bai Yan Zhang Bao-Hua Zhao,College of Life Science,Hebei Normal University,Shijiazhuang 050016,Hebei Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2006(08)
[9]C型产气荚膜梭菌β1、β2毒素基因的融合[J]. 许崇波,曾瑾,许崇利,王玉炯. 微生物学报. 2005(02)
[10]重组A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原的制备及初步免疫保护作用研究[J]. 林明辉,荫俊,邢洪光,侯晓军,王慧,宋伟. 生物工程学报. 2004(01)
硕士论文
[1]产气荚膜梭菌α和ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究[D]. 卢田粉.山东农业大学 2012
[2]分泌抗A型魏氏梭菌肠毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用[D]. 张红英.河南农业大学 2004
本文编号：3210398
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
α毒素和ε毒素基因片段PCR产物的电泳分析结果
.2 pMD18-T-α 和 pMD18-T-ε 质粒的 PCR 和双酶切鉴质粒 M：DNA Marker 5 000；1：PCR 产物，925 bp；EcoRⅠ和 XolⅠ双酶切产物粒 M：DNA Marker 5 000；1：阴性对照；2：SacⅠ和3：PCR 产物，981 bpfication of the recombinant pMD18-T-α and pMD18-T-ε pldouble endonucleases digested-T-α plasmid M: DNA Marker 5 000;1: Product of PCR prcontrol ;3: Product of EcoRⅠand XolⅠdouble endonucleaT-ε plasmid M: DNA Marker 5 000;1: Negative control ; 2 XolⅠdouble endonucleases digested;3: Product of PCR, 9ε 毒素基因的序列分析结果18-T-α 和 pMD18-T-ε 质粒的 E.coli DH5α 甘油菌送上进行测序，测序结果用 DNAStar 软件处理之后与 GeneBA B
质粒pET28a-α的PCR及双酶切鉴定结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]产气荚膜梭菌ι毒素研究进展[J]. 王琳,赵宇亮,何建龙,霍萍萍,张聪敏,赵宝华. 动物医学进展. 2013(11)
[2]D型产气荚膜梭菌ε毒素研究进展[J]. 高洁,张聪敏,刘伟,赵宇亮,赵宝华. 动物医学进展. 2013(10)
[3]不同动物魏氏梭菌病的探讨[J]. 王阳,管同恒,李超. 山东畜牧兽医. 2013(02)
[4]产气荚膜梭菌次要毒力因子的研究进展[J]. 田冬青,蒋玉文,杨京岚,陈小云,孙晔. 畜牧与饲料科学. 2010(10)
[5]产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备[J]. 田冬青,彭小兵,蒋玉文,杨京岚,陈小云,丁家波,屠伟英. 中国兽医学报. 2010(03)
[6]魏氏梭菌引起牛猝死的诊断报告[J]. 孙力,周相华,宫汝娥,艾玉芹,李瑞红. 中国奶牛. 2007(08)
[7]产气荚膜梭菌肠毒素的分子生物学研究进展[J]. 赵立峰. 动物医学进展. 2007(S1)
[8]Cloning of α-β fusion gene from Clostridium perfringens and its expression[J]. Jia-Ning Bai Yan Zhang Bao-Hua Zhao,College of Life Science,Hebei Normal University,Shijiazhuang 050016,Hebei Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2006(08)
[9]C型产气荚膜梭菌β1、β2毒素基因的融合[J]. 许崇波,曾瑾,许崇利,王玉炯. 微生物学报. 2005(02)
[10]重组A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原的制备及初步免疫保护作用研究[J]. 林明辉,荫俊,邢洪光,侯晓军,王慧,宋伟. 生物工程学报. 2004(01)
硕士论文
[1]产气荚膜梭菌α和ε毒素蛋白高效表达体系的构建及其免疫保护性的研究[D]. 卢田粉.山东农业大学 2012
[2]分泌抗A型魏氏梭菌肠毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用[D]. 张红英.河南农业大学 2004
本文编号：3210398
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