枯草芽孢杆菌菌体对RV感染IPEC-J2细胞TLRs和细胞因子mRNA表达的影响
发布时间：2021-06-02 18:16
益生菌具有治疗肠炎、腹泻、改善动物生长性能、免疫调节等作用而受到广泛关注,但是有关益生菌抗病毒作用机制研究很少。轮状病毒（Rotavirus, RV）是引起婴幼儿和仔猪腹泻的重要病原体,主要感染成熟的小肠绒毛上皮细胞,严重威胁人类健康和养殖业的发展。为了研究益生菌-宿主-病毒之间的相互作用关系,木试验采用分离的具有抗RV活性的枯草芽孢杆菌,研究其是否通过激活肠上皮细胞’TLRs表达和增加细胞因子分泌,发挥益生菌的免疫调节作用,从而启动抗病毒反应。主要的研究内容和结果如下：对本实验室从猪的胃肠道已分离、保存的59株益生菌,运用MTT的方法筛选其中具有抗RV活性的菌株。选择一株抗RV活性最高的菌株,经生化鉴定、16sRNA鉴定为枯草芽孢杆菌。由于猪小肠上皮细胞是轮状病毒感染仔猪的主要靶细胞,所以,本试验选择猪小肠上皮细胞（Porcine intestinal epithelial cells,IPEC-J2）,在体外建立RV感染肠上皮细胞模型和枯草芽孢杆菌菌体预处理肠上皮细胞的情况下感染RV,通过在不同时间点检测病毒液的TCID50,研究RV在肠上皮细胞的增殖曲线和枯草芽孢杆菌菌体预处理细...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
1.1 益生菌的概述
1.1.1 益生菌的概念及分类
1.1.2 益生菌的作用机制
1.1.3 益生菌抗病毒的相关研究
1.1.4 枯草芽孢杆菌的抗病毒作用
1.2 轮状病毒的概述
1.2.1 RV的病原学特征
1.2.2 RV的临床表现与致病机制
1.2.3 RV的防治现状
1.3 肠黏膜的概述
1.3.1 肠黏膜屏障的构成和功能
1.3.2 肠黏膜的先天性免疫应答
1.3.3 益生菌调节动物的肠黏膜免疫
1.4 目的意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌种
2.1.2 细胞和毒株
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要溶液的配置
2.1.5 主要实验仪器
2.2 方法
2.2.1 抗RV菌株的筛选及鉴定
2.2.2 RV生长曲线的制备
2.2.3 RT-PCR检测IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量的变化
2.2.4 数据处理及分析
3 结果与分析
3.1 抗RV菌株的筛选及鉴定
3.1.1 抗RV菌株的筛选
3.1.2 筛选菌株的16sRNA鉴定
3.1.3 筛选菌株的生化鉴定
3.2 RV的生长曲线
3.3 IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量的变化
3.3.1 目的基因片段扩增
3.3.2 标准品质粒的构建
3.3.3 IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量的相对变化
4 讨论
4.1 肠道抗RV益生菌株的筛选
4.2 RV在肠上皮细胞的生长曲线及枯草芽孢杆菌对其生长的抑制
4.3 IL-6、IL-8、IHN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量变化的分析
4.3.1 IL-6、IL-8和IFN-γ mRNA表达量变化分析
4.3.2 TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量变化分析
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]在不同营养水平日粮中添加益生菌对肉鸡抗氧化功能、黏膜免疫及回肠菌群的影响[J]. 唐志刚,温超,王恬,周岩民. 中国粮油学报. 2013(01)
[2]益生菌治疗小儿抗生素相关性腹泻48例疗效观察[J]. 邱静,刘金仓. 陕西医学杂志. 2012(01)
[3]NF-κB信号通路在病毒感染中的作用[J]. 王平忠,于海涛,白雪帆,张颖. 细胞与分子免疫学杂志. 2011(08)
[4]添加枯草芽孢杆菌制剂对仔猪生产性能的影响[J]. 黄雪泉. 中国畜牧兽医. 2010(07)
[5]马蹄香治疗婴幼儿轮状病毒肠炎作用机制的初步探讨[J]. 张佩红,陈啸洪,王燕,李华浚,章杭湖. 中国全科医学. 2010(06)
[6]热灭活嗜酸乳杆菌黏附于HeLa细胞后肿瘤细胞免疫学性状的变化[J]. 王红艳,吴晓燕,张旭艳,邢永梅,周亚滨,贾继辉,田永杰. 中国病理生理杂志. 2008(08)
[7]双歧杆菌对轮状病毒感染肠上皮细胞IL-8和TNF-α分泌的影响[J]. 黄鸿眉,程茜. 第四军医大学学报. 2007(22)
[8]益生菌对婴幼儿肺炎并发腹泻的治疗作用[J]. 马红玲,郑跃杰,罗宏英,邓继岿. 中国微生态学杂志. 2005(02)
[9]嗜酸乳杆菌对生殖道上皮细胞的黏附和黏附拮抗作用的研究[J]. 王红艳,贾继辉,邢咏梅,陈春燕,周亚滨,唐伟,程轶喆,于修平. 中华微生物学和免疫学杂志. 2004(10)
[10]益生菌营养及保健作用[J]. 李琴,张世春,曾晓燕,张铁涛. 食品研究与开发. 2004(02)
博士论文
[1]苍苓散对湿热型轮状病毒肠炎肠粘膜免疫及肠道菌群影响的研究[D]. 罗菲.广州中医药大学 2012
[2]丁酸梭菌与肠道上皮细胞互作的分子机制的研究[D]. 高权新.浙江大学 2012
硕士论文
[1]猪鸡肠道益生菌株的分离鉴定及其抗TGEV和IBV的作用[D]. 修晶辉.东北农业大学 2011
[2]鸡胚肠组织细胞培养及益生菌抗NDV作用研究[D]. 王占锋.东北农业大学 2010
本文编号：3210515
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
1.1 益生菌的概述
1.1.1 益生菌的概念及分类
1.1.2 益生菌的作用机制
1.1.3 益生菌抗病毒的相关研究
1.1.4 枯草芽孢杆菌的抗病毒作用
1.2 轮状病毒的概述
1.2.1 RV的病原学特征
1.2.2 RV的临床表现与致病机制
1.2.3 RV的防治现状
1.3 肠黏膜的概述
1.3.1 肠黏膜屏障的构成和功能
1.3.2 肠黏膜的先天性免疫应答
1.3.3 益生菌调节动物的肠黏膜免疫
1.4 目的意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 菌种
2.1.2 细胞和毒株
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要溶液的配置
2.1.5 主要实验仪器
2.2 方法
2.2.1 抗RV菌株的筛选及鉴定
2.2.2 RV生长曲线的制备
2.2.3 RT-PCR检测IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量的变化
2.2.4 数据处理及分析
3 结果与分析
3.1 抗RV菌株的筛选及鉴定
3.1.1 抗RV菌株的筛选
3.1.2 筛选菌株的16sRNA鉴定
3.1.3 筛选菌株的生化鉴定
3.2 RV的生长曲线
3.3 IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量的变化
3.3.1 目的基因片段扩增
3.3.2 标准品质粒的构建
3.3.3 IL-6、IL-8、IFN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量的相对变化
4 讨论
4.1 肠道抗RV益生菌株的筛选
4.2 RV在肠上皮细胞的生长曲线及枯草芽孢杆菌对其生长的抑制
4.3 IL-6、IL-8、IHN-γ、TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量变化的分析
4.3.1 IL-6、IL-8和IFN-γ mRNA表达量变化分析
4.3.2 TLR2、TLR3和TLR9 mRNA表达量变化分析
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]在不同营养水平日粮中添加益生菌对肉鸡抗氧化功能、黏膜免疫及回肠菌群的影响[J]. 唐志刚,温超,王恬,周岩民. 中国粮油学报. 2013(01)
[2]益生菌治疗小儿抗生素相关性腹泻48例疗效观察[J]. 邱静,刘金仓. 陕西医学杂志. 2012(01)
[3]NF-κB信号通路在病毒感染中的作用[J]. 王平忠,于海涛,白雪帆,张颖. 细胞与分子免疫学杂志. 2011(08)
[4]添加枯草芽孢杆菌制剂对仔猪生产性能的影响[J]. 黄雪泉. 中国畜牧兽医. 2010(07)
[5]马蹄香治疗婴幼儿轮状病毒肠炎作用机制的初步探讨[J]. 张佩红,陈啸洪,王燕,李华浚,章杭湖. 中国全科医学. 2010(06)
[6]热灭活嗜酸乳杆菌黏附于HeLa细胞后肿瘤细胞免疫学性状的变化[J]. 王红艳,吴晓燕,张旭艳,邢永梅,周亚滨,贾继辉,田永杰. 中国病理生理杂志. 2008(08)
[7]双歧杆菌对轮状病毒感染肠上皮细胞IL-8和TNF-α分泌的影响[J]. 黄鸿眉,程茜. 第四军医大学学报. 2007(22)
[8]益生菌对婴幼儿肺炎并发腹泻的治疗作用[J]. 马红玲,郑跃杰,罗宏英,邓继岿. 中国微生态学杂志. 2005(02)
[9]嗜酸乳杆菌对生殖道上皮细胞的黏附和黏附拮抗作用的研究[J]. 王红艳,贾继辉,邢咏梅,陈春燕,周亚滨,唐伟,程轶喆,于修平. 中华微生物学和免疫学杂志. 2004(10)
[10]益生菌营养及保健作用[J]. 李琴,张世春,曾晓燕,张铁涛. 食品研究与开发. 2004(02)
博士论文
[1]苍苓散对湿热型轮状病毒肠炎肠粘膜免疫及肠道菌群影响的研究[D]. 罗菲.广州中医药大学 2012
[2]丁酸梭菌与肠道上皮细胞互作的分子机制的研究[D]. 高权新.浙江大学 2012
硕士论文
[1]猪鸡肠道益生菌株的分离鉴定及其抗TGEV和IBV的作用[D]. 修晶辉.东北农业大学 2011
[2]鸡胚肠组织细胞培养及益生菌抗NDV作用研究[D]. 王占锋.东北农业大学 2010
本文编号：3210515
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