豆状带绦虫抗原特性分析与TPO18重组蛋白的保护性分析
发布时间：2021-06-03 18:54
采集自然感染的兔豆状囊尾蚴，人工感染犬，收集孕卵节片，以不同数量虫卵感染家兔和小鼠，定期采血，用间接ELISA法检测家兔和小鼠的抗体消长。结果显示：家兔自感染后第8d抗体水平开始升高，第43d开始逐渐下降，直至第63d抗体仍呈较高的阳性水平。小鼠自感染后第8d抗体水平开始升高，第38d开始逐渐下降，直至第49d抗体仍呈较高的阳性水平。结果表明，在本试验所设条件下，抗体水平随感染数量的增加而升高；感染剂量最大组抗体水平上升得最快，且抗体水平高于其他攻虫组。对豆状带绦虫不同发育阶段虫体、猪囊尾蚴囊液、羊脑多头蚴及其囊液进行SDS-PAGE，分离出48条主要蛋白区带，分子量范围为30.4114.9ku。以第50d感染家兔血清对13种虫体抗原作Western-blot分析，结果显示，13种虫体抗原在59.4ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴阳性血清识别。羊脑多头蚴与豆状囊尾蚴特异性抗原极相似，共有4条相似带，表明它们之间存在着交叉反应。根据带科其他种属绦虫18ku基因的保守区设计引物，以豆状带绦虫六钩蚴RNA为模板，进行RT-PCR，扩增出TPO18完整开放...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Summary
主要缩略词英汉对照表
第一章 文献综述
1 虫体天然抗原
1.1 六钩蚴及其分泌/排泄物
1.2 原头蚴及其组分抗原
1.3 细胞苗
2 基因工程疫苗
2.1 重组蛋白疫苗
2.2 核酸疫苗
3 疫苗研究展望
第二章 豆状囊尾蚴人工感染家兔和小鼠后抗体消长及豆状带绦虫抗原特性分析
1 材料与方法
1.1 主要仪器及试剂
1.2 虫种及实验动物
1.3 犬的感染与豆状带绦虫虫卵的获取
1.4 虫体抗原的制备
1.5 豆状囊尾蚴人工感染家兔和小鼠试验
1.6 虫体蛋白的 SDS-PAGE 和 Western-blot
2 结果
2.1 家兔抗体水平的 ELISA 检测
2.2 SDS-PAGE 和 Western-blot 电泳谱
2.3 虫体蛋白分子量
3 讨论
第三章 TPO18 基因的原核表达与表达产物的免疫保护试验
1 材料与方法
1.1 质粒、菌株及实验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 豆状带绦虫六钩蚴的活化和总 RNA 的提取
1.5 TPO18 基因的 RT-PCR 扩增
1.6 重组表达质粒 pGEX-TPO18 的构建
1.7 重组蛋白的诱导表达及纯化
1.8 重组蛋白的反应原性鉴定
1.9 家兔免疫保护试验
2 结果
2.1 豆状带绦虫 TPO18 基因片段的扩增
2.2 重组质粒 pGEX-TPO18 的鉴定
2.3 重组蛋白的表达和纯化
2.4 重组蛋白 pGEX-TPO18 的反应原性
2.5 家兔免疫保护试验
3 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简历
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]绵羊脑多头蚴病45m基因在多头绦虫和细粒棘球绦虫不同发育阶段同源性的比较[J]. 由弘,张壮志,赵莉,石保新,吐尔洪·依米提,王进成,张文宝,崔德胜,艾尔肯,郭金梁. 中国人兽共患病学报. 2009(09)
[2]豆状囊尾蚴人工感染家兔抗体水平的消长[J]. 王晓霞,骆学农,孙晓林,于三科,才学鹏. 中国兽医科学. 2009(04)
[3]兔豆状囊尾蚴和豆状带绦虫头节的组织结构观察[J]. 孙晓林,骆学农,王晓霞,才学鹏. 中国兽医科学. 2008(09)
[4]多头蚴病保护性基因的分离与表达[J]. 由弘,张壮志,赵莉,石保新,吐尔洪·依米提,王进成,张文宝,崔德胜,艾尔肯,郭金梁. 中国人兽共患病学报. 2008(09)
[5]猪囊尾蚴DNA疫苗pVAX1/TSOL18的安全性评估[J]. 刘斌,才学鹏,郭爱疆,骆学农,陈晓宇,丁军涛,刘英. 中国兽医寄生虫病. 2008(05)
[6]家兔豆状囊尾蚴病的组织病理学研究[J]. 孙晓林,陈怀涛,才学鹏. 畜牧兽医学报. 2008(08)
[7]猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究[J]. 郭爱疆,才学鹏,房永祥,贾万忠,骆学农,刘红霞. 畜牧兽医学报. 2008(07)
[8]肉兔豆状囊尾蚴病的危害性研究[J]. 周永学,杜爱芳,张雪娟,吴永明,童凤英,吴广运. 浙江农业科学. 2008(03)
[9]细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定[J]. 周辉,李文桂. 中国人兽共患病学报. 2008(04)
[10]细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗的构建及其表达效率研究[J]. 李文桂,朱佑明. 免疫学杂志. 2007(05)
博士论文
[1]猪带绦虫六钩蚴45W-4B和TSO18重组基因工程疫苗的研究[D]. 骆学农.中国农业科学院 2005
本文编号：3211059
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Summary
主要缩略词英汉对照表
第一章 文献综述
1 虫体天然抗原
1.1 六钩蚴及其分泌/排泄物
1.2 原头蚴及其组分抗原
1.3 细胞苗
2 基因工程疫苗
2.1 重组蛋白疫苗
2.2 核酸疫苗
3 疫苗研究展望
第二章 豆状囊尾蚴人工感染家兔和小鼠后抗体消长及豆状带绦虫抗原特性分析
1 材料与方法
1.1 主要仪器及试剂
1.2 虫种及实验动物
1.3 犬的感染与豆状带绦虫虫卵的获取
1.4 虫体抗原的制备
1.5 豆状囊尾蚴人工感染家兔和小鼠试验
1.6 虫体蛋白的 SDS-PAGE 和 Western-blot
2 结果
2.1 家兔抗体水平的 ELISA 检测
2.2 SDS-PAGE 和 Western-blot 电泳谱
2.3 虫体蛋白分子量
3 讨论
第三章 TPO18 基因的原核表达与表达产物的免疫保护试验
1 材料与方法
1.1 质粒、菌株及实验动物
1.2 主要试剂
1.3 主要仪器
1.4 豆状带绦虫六钩蚴的活化和总 RNA 的提取
1.5 TPO18 基因的 RT-PCR 扩增
1.6 重组表达质粒 pGEX-TPO18 的构建
1.7 重组蛋白的诱导表达及纯化
1.8 重组蛋白的反应原性鉴定
1.9 家兔免疫保护试验
2 结果
2.1 豆状带绦虫 TPO18 基因片段的扩增
2.2 重组质粒 pGEX-TPO18 的鉴定
2.3 重组蛋白的表达和纯化
2.4 重组蛋白 pGEX-TPO18 的反应原性
2.5 家兔免疫保护试验
3 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简历
导师简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]绵羊脑多头蚴病45m基因在多头绦虫和细粒棘球绦虫不同发育阶段同源性的比较[J]. 由弘,张壮志,赵莉,石保新,吐尔洪·依米提,王进成,张文宝,崔德胜,艾尔肯,郭金梁. 中国人兽共患病学报. 2009(09)
[2]豆状囊尾蚴人工感染家兔抗体水平的消长[J]. 王晓霞,骆学农,孙晓林,于三科,才学鹏. 中国兽医科学. 2009(04)
[3]兔豆状囊尾蚴和豆状带绦虫头节的组织结构观察[J]. 孙晓林,骆学农,王晓霞,才学鹏. 中国兽医科学. 2008(09)
[4]多头蚴病保护性基因的分离与表达[J]. 由弘,张壮志,赵莉,石保新,吐尔洪·依米提,王进成,张文宝,崔德胜,艾尔肯,郭金梁. 中国人兽共患病学报. 2008(09)
[5]猪囊尾蚴DNA疫苗pVAX1/TSOL18的安全性评估[J]. 刘斌,才学鹏,郭爱疆,骆学农,陈晓宇,丁军涛,刘英. 中国兽医寄生虫病. 2008(05)
[6]家兔豆状囊尾蚴病的组织病理学研究[J]. 孙晓林,陈怀涛,才学鹏. 畜牧兽医学报. 2008(08)
[7]猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究[J]. 郭爱疆,才学鹏,房永祥,贾万忠,骆学农,刘红霞. 畜牧兽医学报. 2008(07)
[8]肉兔豆状囊尾蚴病的危害性研究[J]. 周永学,杜爱芳,张雪娟,吴永明,童凤英,吴广运. 浙江农业科学. 2008(03)
[9]细粒棘球绦虫转基因植物载体重组pBI-Eg95-EgA31质粒构建及鉴定[J]. 周辉,李文桂. 中国人兽共患病学报. 2008(04)
[10]细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗的构建及其表达效率研究[J]. 李文桂,朱佑明. 免疫学杂志. 2007(05)
博士论文
[1]猪带绦虫六钩蚴45W-4B和TSO18重组基因工程疫苗的研究[D]. 骆学农.中国农业科学院 2005
本文编号：3211059
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