自噬在硫酸化银杏叶多糖体外诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究
发布时间：2021-06-05 22:46
肝癌是人类和动物常发的恶性肿瘤性疾病,其中肝细胞癌（HCC）在临床上的发病率最高,约占肝癌总发病率的70%-90%。目前,对于HCC的治疗主要采取姑息性手术治疗、化学药物治疗等方法,虽然这些方法具有一定的治疗效果,但同时具有高风险、毒副作用大、对机体损伤严重等弊端。因此,开发治疗HCC的天然新药物、提高药物作用于HCC的敏感性,是当前抗肿瘤药物研发的重点。银杏叶多糖（GBLP）是从银杏叶中提取出来的一种活性成分,它具有调节免疫、抗肿瘤、抗氧化等多种生物学活性。有研究表明,经硫酸化分子修饰后,许多中药多糖的抗肿瘤活性明显增强。因此,本研究采用氯磺酸-吡啶法制备了硫酸化银杏叶多糖（SGBLP）,以肝癌HepG2细胞为试验模型,检测了SGBLP对HepG2细胞细胞活性、主要凋亡蛋白和自噬蛋白及信号转导通路PI3K/AKT/mTOR的影响。主要研究结果如下:1.采用水提醇沉法从银杏叶干粉中提取银杏叶粗多糖,经过脱蛋白、除色素、透析等一系列处理得到精制银杏叶多糖,苯酚-硫酸法测得多糖含量为84.66%,考马斯亮蓝法测得蛋白含量为0.561%,然后用氯磺酸-吡啶法对GBLP进行硫酸化分子修饰,氯化...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
总糖含量测定的标准曲线
山东农业大学硕士学位论文25图2蛋白质含量检测的标准曲线Fig.2BSAstandardcurve3.1.4取代度采用氯化钡-明胶法对SGBLP的硫酸基取代度进行测定，使用分光光度计在波长360nm进行检测，以干燥至恒重的硫酸钾作为标准品绘制标准曲线（图3）。将待测样品的吸光度带入公式计算，得到SGBLP的取代度为2.7。图3硫酸根含量标准曲线Fig.3Thestandardcurveofsulfatedgroup3.2SGBLP对HepG2细胞活力的影响本实验以不同浓度的SGBLP（0、25、50、100、200、400、600、800、1000、1200μg/mL）分别处理HepG2细胞一定时间后（24、48、72h）；MTT结果显示，不同浓度的SGBLP处理HepG2细胞24及48h后，对HepG2细胞活力影响成剂量依赖性，即随着用药剂量不断增大，细胞活力逐渐下降，当浓度为50μg/mL时（P<0.05），细胞活力明显下降，
山东农业大学硕士学位论文25图2蛋白质含量检测的标准曲线Fig.2BSAstandardcurve3.1.4取代度采用氯化钡-明胶法对SGBLP的硫酸基取代度进行测定，使用分光光度计在波长360nm进行检测，以干燥至恒重的硫酸钾作为标准品绘制标准曲线（图3）。将待测样品的吸光度带入公式计算，得到SGBLP的取代度为2.7。图3硫酸根含量标准曲线Fig.3Thestandardcurveofsulfatedgroup3.2SGBLP对HepG2细胞活力的影响本实验以不同浓度的SGBLP（0、25、50、100、200、400、600、800、1000、1200μg/mL）分别处理HepG2细胞一定时间后（24、48、72h）；MTT结果显示，不同浓度的SGBLP处理HepG2细胞24及48h后，对HepG2细胞活力影响成剂量依赖性，即随着用药剂量不断增大，细胞活力逐渐下降，当浓度为50μg/mL时（P<0.05），细胞活力明显下降，
【参考文献】：
期刊论文
[1]EGFR突变对肺腺癌细胞自噬活性及LC3、Beclin1基因表达的影响[J]. 马阳,王蕊,纪晓坤,吴娟,杜芸,王珩. 河北医科大学学报. 2019(09)
[2]β-1,3/1,6-葡聚糖的免疫调控机理及其在畜牧生产中的应用[J]. 杨泰,杨媚,邓圣庭,陈清华. 动物营养学报. 2019(08)
[3]硫酸化杏鲍菇多糖的理化特性及体外生物活性研究[J]. 伯继芳,马琦,刘东茹,刘昱迪,佴逸凡,李梅,徐怀德. 现代食品科技. 2019(06)
[4]自噬与细胞稳态调控及肿瘤的研究进展[J]. 王文栋,周水洪. 国际耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2019 (01)
[5]人参多糖饮料的制备及其防辐射功效的研究[J]. 吴秀华,李皓,昌友权,朱可彤. 食品工业. 2017(11)
[6]香菇多糖体内抗氧化活性研究[J]. 杨溢烁,曾德永,刘艳,张丽香,张智. 中国食物与营养. 2016(08)
[7]银杏叶多糖的制备及其抗氧化性[J]. 许春雨,王爽,王璐,马志扬,邹丁丁,叶淑红,刘艳. 大连工业大学学报. 2016(04)
[8]氯磺酸-吡啶法酯化修饰海参岩藻聚糖硫酸酯的研究[J]. 王瑞芳,吴光斌,谢远红,陈素艳,李莉莉. 内蒙古民族大学学报(自然科学版). 2016(04)
[9]酶-Sevag法除酸浆果实多糖蛋白工艺的研究[J]. 徐丹鸿,王爽,林道鹏. 安徽农业科学. 2016(04)
[10]组培霍山石斛、野生霍山石斛及河南石斛多糖及乙醇溶出物动态积累规律研究[J]. 陈乃东,陈乃富,王陶陶,顾镇. 天然产物研究与开发. 2015(12)
博士论文
[1]褐藻多糖对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭活性及巨噬细胞功能的影响及机制研究[D]. 林俊达.山东大学 2017
[2]黑灵芝多糖的免疫调节活性及其作用机制[D]. 余强.南昌大学 2014
[3]黑灵芝多糖的抗肿瘤活性及其分子机制初探[D]. 张莘莘.南昌大学 2014
[4]PI3K/PTEN/AKT/Survivin信号通路和IκB/NFκB信号通路对子宫内膜异位症的调节及意义[D]. 张辉.山东大学 2010
[5]当归多糖的结构与抗肿瘤作用及其机制研究[D]. 曹蔚.第四军医大学 2006
硕士论文
[1]LncRNA UCA1对细胞自噬和结肠癌细胞增殖凋亡的影响[D]. 宋凤玲.华中农业大学 2017
[2]ATG基因调控酵母自噬的系统研究[D]. 卫亚平.华中科技大学 2016
[3]肿瘤抑制蛋白Spred2与LC3结合促进自噬成熟诱导自噬依赖性细胞死亡[D]. 刘敏.大连医科大学 2016
[4]重组Lac Z酵母细胞构建及对化学诱变原的高通量筛选研究[D]. 王瑞鲲.扬州大学 2015
[5]基于硫酸化修饰的抗蛋白质非酶糖基化活性霍山石斛多糖的构效关系[D]. 肖婧婧.合肥工业大学 2013
[6]低分子量海带岩藻多糖的制备及其抗肿瘤活性的研究[D]. 刘颖.安徽农业大学 2012
[7]肿瘤细胞自噬与肿瘤细胞抗药性机理的初步研究[D]. 解艳艳.山东大学 2012
[8]黄酮类化合物对电离辐射诱导PC12细胞损伤的防护作用及其机制研究[D]. 喻晶.湖北中医药大学 2012
[9]银杏叶多糖的分离纯化和降血糖功效研究[D]. 夏秀华.江南大学 2006
本文编号：3213063
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
总糖含量测定的标准曲线
山东农业大学硕士学位论文25图2蛋白质含量检测的标准曲线Fig.2BSAstandardcurve3.1.4取代度采用氯化钡-明胶法对SGBLP的硫酸基取代度进行测定，使用分光光度计在波长360nm进行检测，以干燥至恒重的硫酸钾作为标准品绘制标准曲线（图3）。将待测样品的吸光度带入公式计算，得到SGBLP的取代度为2.7。图3硫酸根含量标准曲线Fig.3Thestandardcurveofsulfatedgroup3.2SGBLP对HepG2细胞活力的影响本实验以不同浓度的SGBLP（0、25、50、100、200、400、600、800、1000、1200μg/mL）分别处理HepG2细胞一定时间后（24、48、72h）；MTT结果显示，不同浓度的SGBLP处理HepG2细胞24及48h后，对HepG2细胞活力影响成剂量依赖性，即随着用药剂量不断增大，细胞活力逐渐下降，当浓度为50μg/mL时（P<0.05），细胞活力明显下降，
山东农业大学硕士学位论文25图2蛋白质含量检测的标准曲线Fig.2BSAstandardcurve3.1.4取代度采用氯化钡-明胶法对SGBLP的硫酸基取代度进行测定，使用分光光度计在波长360nm进行检测，以干燥至恒重的硫酸钾作为标准品绘制标准曲线（图3）。将待测样品的吸光度带入公式计算，得到SGBLP的取代度为2.7。图3硫酸根含量标准曲线Fig.3Thestandardcurveofsulfatedgroup3.2SGBLP对HepG2细胞活力的影响本实验以不同浓度的SGBLP（0、25、50、100、200、400、600、800、1000、1200μg/mL）分别处理HepG2细胞一定时间后（24、48、72h）；MTT结果显示，不同浓度的SGBLP处理HepG2细胞24及48h后，对HepG2细胞活力影响成剂量依赖性，即随着用药剂量不断增大，细胞活力逐渐下降，当浓度为50μg/mL时（P<0.05），细胞活力明显下降，
【参考文献】：
期刊论文
[1]EGFR突变对肺腺癌细胞自噬活性及LC3、Beclin1基因表达的影响[J]. 马阳,王蕊,纪晓坤,吴娟,杜芸,王珩. 河北医科大学学报. 2019(09)
[2]β-1,3/1,6-葡聚糖的免疫调控机理及其在畜牧生产中的应用[J]. 杨泰,杨媚,邓圣庭,陈清华. 动物营养学报. 2019(08)
[3]硫酸化杏鲍菇多糖的理化特性及体外生物活性研究[J]. 伯继芳,马琦,刘东茹,刘昱迪,佴逸凡,李梅,徐怀德. 现代食品科技. 2019(06)
[4]自噬与细胞稳态调控及肿瘤的研究进展[J]. 王文栋,周水洪. 国际耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2019 (01)
[5]人参多糖饮料的制备及其防辐射功效的研究[J]. 吴秀华,李皓,昌友权,朱可彤. 食品工业. 2017(11)
[6]香菇多糖体内抗氧化活性研究[J]. 杨溢烁,曾德永,刘艳,张丽香,张智. 中国食物与营养. 2016(08)
[7]银杏叶多糖的制备及其抗氧化性[J]. 许春雨,王爽,王璐,马志扬,邹丁丁,叶淑红,刘艳. 大连工业大学学报. 2016(04)
[8]氯磺酸-吡啶法酯化修饰海参岩藻聚糖硫酸酯的研究[J]. 王瑞芳,吴光斌,谢远红,陈素艳,李莉莉. 内蒙古民族大学学报(自然科学版). 2016(04)
[9]酶-Sevag法除酸浆果实多糖蛋白工艺的研究[J]. 徐丹鸿,王爽,林道鹏. 安徽农业科学. 2016(04)
[10]组培霍山石斛、野生霍山石斛及河南石斛多糖及乙醇溶出物动态积累规律研究[J]. 陈乃东,陈乃富,王陶陶,顾镇. 天然产物研究与开发. 2015(12)
博士论文
[1]褐藻多糖对口腔鳞状细胞癌细胞侵袭活性及巨噬细胞功能的影响及机制研究[D]. 林俊达.山东大学 2017
[2]黑灵芝多糖的免疫调节活性及其作用机制[D]. 余强.南昌大学 2014
[3]黑灵芝多糖的抗肿瘤活性及其分子机制初探[D]. 张莘莘.南昌大学 2014
[4]PI3K/PTEN/AKT/Survivin信号通路和IκB/NFκB信号通路对子宫内膜异位症的调节及意义[D]. 张辉.山东大学 2010
[5]当归多糖的结构与抗肿瘤作用及其机制研究[D]. 曹蔚.第四军医大学 2006
硕士论文
[1]LncRNA UCA1对细胞自噬和结肠癌细胞增殖凋亡的影响[D]. 宋凤玲.华中农业大学 2017
[2]ATG基因调控酵母自噬的系统研究[D]. 卫亚平.华中科技大学 2016
[3]肿瘤抑制蛋白Spred2与LC3结合促进自噬成熟诱导自噬依赖性细胞死亡[D]. 刘敏.大连医科大学 2016
[4]重组Lac Z酵母细胞构建及对化学诱变原的高通量筛选研究[D]. 王瑞鲲.扬州大学 2015
[5]基于硫酸化修饰的抗蛋白质非酶糖基化活性霍山石斛多糖的构效关系[D]. 肖婧婧.合肥工业大学 2013
[6]低分子量海带岩藻多糖的制备及其抗肿瘤活性的研究[D]. 刘颖.安徽农业大学 2012
[7]肿瘤细胞自噬与肿瘤细胞抗药性机理的初步研究[D]. 解艳艳.山东大学 2012
[8]黄酮类化合物对电离辐射诱导PC12细胞损伤的防护作用及其机制研究[D]. 喻晶.湖北中医药大学 2012
[9]银杏叶多糖的分离纯化和降血糖功效研究[D]. 夏秀华.江南大学 2006
本文编号：3213063
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