CcpA在单核细胞增生李斯特菌中的功能初探

发布时间：2021-06-07 14:13

　　单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes, Lm）是一种重要的革兰氏阳性人畜共患食源性致病菌。分解代谢物控制蛋白CcpA （catabolite control protein A）是一种具有多效性功能的调控蛋白。在革兰氏阳性菌中,CcpA不仅参与碳分解代谢物阻遏（carbon catabolite repression, CCR）效应,还参与生物被膜形成和毒力基因表达等多种生理过程。Lm中也存在CcpA的编码基因ccpA,但其多效功能未有文献阐明,因此,本研究通过构建CcpA缺失菌株,比较Lm野生株EGDe和CcpA缺失株EGDeAccpA在菌落形态、鞭毛运动、碳源利用和生物被膜形成等的差异,初步探索CcpA在Lm中的多效功能。实验结果如下：1. CcpA在Lm菌落形态、鞭毛运动和生长代谢中具有重要作用。缺失ccpA基因后：细菌在固体BHI平板上菌落直径增大,边缘变的不规则；细菌丧失了运动能力,显微镜下观察不到鞭毛存在；缺失株不能在添加了葡萄糖的基础培养基MEM中生长,但在LB培养基中的生长速度加快,生物量增加。2. CcpA在Lm生物被膜形成中具有重要作用... 

【文章来源】：华中师范大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 单核细胞增生李斯特菌的生理特性
    1.2 单核细胞增生李斯特菌的入侵机制
    1.3 CcpA因子与碳分解代谢物阻遏(CCR)的关系
    1.4 CcpA在其它生理活动中的功能
        1.4.1 CcpA对糖酵解途径的促进作用
        1.4.2 CcpA对有氧呼吸作用的抑制
        1.4.3 CcpA对生物被膜形成的影响
    1.5 单核细胞增生李斯特菌中CcpA的功能研究进展
第二章 构建单核细胞增生李斯特菌CcpA缺失和回复菌株
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验菌株及质粒
        2.1.2 主要实验仪器
        2.1.3 实验药品及配置
        2.1.4 引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 大肠杆菌DH5a感受态的制备
        2.2.2 单核细胞增生李斯特菌EGDe感受态细胞的制备
        2.2.3 CcpA缺失菌株的构建
        2.2.4 α—葡萄糖苷酶活性的检测
        2.2.5 构建单核细胞增生李斯特菌ccpA缺失的回复菌株
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 重组载体pUC18-ccpA(C)的构建结果
        2.3.2 重组载体pUC18-ccpA(C+D)的构建结果
        2.3.3 重组穿梭载体pLSV101-ccpA(C+D)的构建结果
        2.3.4 重组穿梭载体pLSV101-ccpA(C+D)电转化EGDe后的鉴定结果
        2.3.5 EGDe△ccpA的鉴定结果
        2.3.6 CcpA缺失对α-葡萄糖苷酶活性的影响
        2.3.7 重组载体T-ccpA的构建结果
    2.4 讨论
第三章 CcpA在单核细胞增生李斯特菌生理功能中的作用
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验菌株
        3.1.2 药品及配制
    3.2 实验方法
        3.2.1 菌落形态及大小的观察方法
        3.2.2 生长曲线的测定方法
        3.2.3 细菌运动的观察方法
        3.2.4 细菌鞭毛形态及运动的观察方法
    3.3 实验结果及分析
        3.3.1 ccpA缺失对菌落形态及大小的影响
        3.3.2 ccpA缺失对细菌生长的影响
        3.3.3 ccpA缺失对细菌运动性的影响
        3.3.4 ccpA缺失对细菌的鞭毛生长情况的影响
第四章 CcpA在单核细胞增生李斯特菌中生物被膜形成中的作用
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验菌株
        4.1.2 药品及配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 生物被膜的制备
        4.2.2 观察生物被膜的形态
    4.3 实验结果及分析
第五章 CcpA在单核细胞增生李斯特菌CCR效应中的作用
    5.1 实验材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 实验药品及配置
    5.2 实验方法
        5.2.1 培养基准备
        5.2.2 测定生长曲线
    5.3 实验结果及分析
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]微生物分解代谢物控制蛋白CcpA的研究进展[J]. 吴艳,顾阳,任聪,杨晟,姜卫红.  生命科学. 2011(09)
[2]InlA和InlB介导单核细胞增生李斯特菌入侵宿主细胞分子机制的研究进展[J]. 冯莹颖,张强,黄兰红,秦龙娟,罗勤.  微生物学通报. 2009(12)
[3]单核细胞增生李斯特菌PrfA蛋白转录调控毒力基因表达的分子机制[J]. 罗勤,张晓莉,李兵,冯爱平,钱跃.  微生物学通报. 2008(02)
[4]β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展[J]. 李华,高丽.  食品与生物技术学报. 2007(02)
[5]枯草芽孢杆菌ccpA基因敲除及对其核黄素产量的影响[J]. 应明,班睿.  微生物学报. 2006(01)
[6]食品中单核细胞增生李斯特菌的危害及其检测[J]. 沈晓盛,郑国兴,李庆,刘承初.  食品与发酵工业. 2004(08)
[7]单核细胞增生李斯特菌简介[J]. 董丽丽,王春生,安笑秋,韩立卓.  中国乡村医药. 2000(12)



本文编号：3216729