水牛乳腺基因表达谱与生长激素转基因水牛的初步研究

发布时间：2021-06-07 23:40

　　水牛是中国南方极具开发潜力的主要家畜,具有耐粗饲、乳品品质好等优点。但由于我国本地水牛产奶性能低下,致使奶水牛产业的发展缓慢。因此,如何应用现代生物技术培育出高产奶量的水牛新品种是目前要解决的主要问题。本研究首先分析了水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织基因表达谱,寻找差异表达基因,研究水牛的泌乳机制,并为培育高产奶量的转基因水牛提供丰富的候选基因素材；然后,探索转座子系统在水牛转基因中的应用,以期提高水牛转基因的效率；构建了乳腺特异性生长激素基因（GH）转基因表达载体,在乳腺细胞和乳腺组织中进行检测,分析外源GH基因的表达对乳蛋白等基因表达的影响；最后,采用随机整合、转座子主动整合等转基因技术将重组GH基因导入水牛基因组,生产GH转基因的水牛胚胎,以期培育出高产奶量转基因水牛新品种。本研究取得的主要结果总结如下：1.水牛泌乳期与非泌乳期基因表达谱及差异表达分析。构建水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织基因表达谱,分析差异表达和泌乳期高丰度表达的基因,探讨水牛泌乳的分子机制,也为转基因水牛提供外源基因乳腺泌乳期特异性表达启动子。基因表达谱序列拼接后获得114,014个单一的Unigenes,与牛的基因... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
縮略词(Abbreviations)
第一部分 文献综述
    第一章 乳腺发育与生长激素转基因动物
        1 乳腺发育机理
        2 血液中的乳蛋白成份
        3 生长激素
            3.1 概况
            3.2 牛生长激素
        4 外源注射BST促进产奶量
            4.1 BST处理安全性
            4.2 BST处理效果
            4.3 BST注射促进泌乳的机制
        5 生长激素转基因动物研究进展
        6 乳腺特异性表达生长激素
        7 生长激素转基因的影响
            7.1 对内源性生长激素的影响
            7.2 对生长性状的影响
        8 生长激素转基因动物存在的问题与展望
    第二章 转座子转基因动物研究进展
        1 转座子概述
        2 主动整合与转座子转基因
        3 PB转座子(PIGGYBAC TRANSPOSON)
        4 SB转座子(SLEEPING BEAUTYTRANSPOSON)
        5 PP转座子(PASSPORT TRANSPOSON)
    研究的目的与意义
第二部分 实验内容
    第三章 水牛乳腺基因表达谱分析与乳腺细胞永生化
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 主要试剂与仪器
            1.3 实验方法
            1.4 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 水牛乳腺组织基因表达谱构建
            2.2 基因表达谱中差异表达基因
            2.3 水牛泌乳期与非泌乳期期基因表达
            2.4 水牛乳腺上皮细胞(BME)及永生化
            2.5 永生化BME细胞,泌乳期与非泌乳期乳腺组织基因表达对比
        3 讨论
            3.1 乳腺基因表达谱分析
            3.2 乳蛋白基因表达
            3.3 泌乳相关基因表达
            3.4 水牛乳腺上皮细胞的永生化
        4 小结
    第四章 水牛转座子转基因的初步研究
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 药品与试剂
            1.2 转基因载体
            1.3 实验方法
            1.4 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 转基因BFF细胞荧光观察与neo整合检测
            2.2 外源基因整合位点检测
            2.3 随机整合与转座子转基因效率比较
            2.4 转座子转基因系统的优化
            2.5 转座子转基因拷贝数检测
        3 讨论
            3.1 随机整合与主动整合转基因效率
            3.2 转座子转基因体系优化
            3.3 转基因整合拷贝数
        4 小结
    第五章 生长激素转基因水牛的初步研究
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 材料与试剂
            1.2 仪器与设备
            1.3 实验方法
        2. 结果与分析
            2.1 人、奶牛、水牛GH基因
            2.2 GH转基因在Bcap37乳腺细胞中的表达
            2.3 GH转基因对BME乳腺细胞基因表达的影响
            2.4 转GH基因水牛胚胎发育观察及早产转基因克隆水牛的鉴定
        3. 讨论
            3.1 生长激素基因及转基因表达
            3.2 生长激素转基因对乳腺细胞和乳腺组织的影响
            3.3 GH转基因牛
        4 小结
研究结论
参考文献
附录 (APPENDIX)
    附录1：水牛生长激素基因编码区序列GENBANK提交(JF894306)
    附表1：水牛乳腺泌乳期与非泌乳期乳腺差异表达基因-KEGG归类
    附表2：泌乳期表达量上调的基因列表(部分)
    附表3：泌乳期表达量下调的基因列表(部分)
致谢
攻读学位期间发表的论文



本文编号：3217530