猪流行性腹泻病毒（PEDV）膜蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选
发布时间：2021-06-08 19:53
猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以呕吐、腹泻和食欲下降为病症基本特征,各个年龄猪均易感,带给养猪业巨大的损失。PEDV编码结构蛋白S、E、M、N和16个非结构蛋白。M蛋白是PEDV病毒囊膜蛋白中含量最多的蛋白,参与病毒的组装,并在病毒逃避宿主天然免疫方面发挥重要的作用,但是,目前的研究并不清楚与M蛋白直接作用的宿主蛋白,以及M蛋白是否还具有其他生物特性。因此,这些宿主蛋白的筛选有助于解析病毒的致病机理,并对找出影响病毒复制、装配及与宿主相互作用的靶点,对发展新型的抗病毒药物和疫苗都具有很重要的影响。本研究的研究内容及结果如下:（1）与PEDV M互作的宿主蛋白的筛选方法一:重组质粒瞬时转染筛选猪小肠上皮（IPEC-J2）细胞内与PEDV M蛋白互作的蛋白。构建带有M-APEX2、APEX2基因的重组质粒,并转染至IPEC-J2细胞,通过底物催化抗坏血酸过氧化物酶（APEX2）标记互作蛋白;构建带有M-HA基因的重组...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PEDV基因组结构示意图
图 1-2 PEDV 基因组复制[[45]Figure 1-2 The replication of PEDV[45]1.2 冠状病毒 M 蛋白的研究进展冠状病毒感染细胞后，病毒蛋白不仅通过阻断一条或多条蛋白的干扰素和NF-κB 信号通路增强病毒的复制[46,47]，而且通过不同的路径和靶点拮抗先天性免疫应答[46]，导致细胞转录模式、细胞循环周期、凋亡途径等发生改变[48]。M 蛋白是冠状病毒的主要结构蛋白之一，属于膜糖蛋白，具有高度保守的糖基化序列，它在病毒和宿主细胞之间的互作过程中发挥重要作用[49]。M 蛋白含有三个跨膜结构域，从 N 端开始依次为 TM1、TM2 和 TM3，主要聚集在高尔基体复合物，通过与 S 蛋白和 N 蛋白的相互作用参与病毒的组装[50]，负责将病毒 RNA 包装成成熟的病毒粒子。在病毒装配期间将核衣壳连接到囊膜上，决定病毒粒子的装配位点、病毒成熟及出芽位点[51]。病毒感染、复制期间，宿主的先天性免疫应答是抗病毒的第一道屏障，在冠状病毒蛋白拮抗宿主的先天性免疫应答研究中，M 蛋白是近几年研究的热点之一。SARS-CoV 结构蛋白调节细胞功能的研究显示，M 蛋白比 N 蛋白更能有效
上海海洋大学硕士学位论文12 年， Roux 等[71]建立了 BioID 方法，利用 biotin ligase 在细胞内白有相互作用的附近的蛋白。但是，biotin ligase 标记的周期长导较大，以致检测到一些不相关的蛋白。2014 年，Alice YTing[72,7工程改造的抗坏血酸过氧化物酶（APEX2）在底物生物素苯酚作 1 毫秒的短暂时间标记细胞中小于 20 纳米半径区域内所有的蛋白谱鉴定标记的蛋白质，该项技术的原理见图 1-3。该团队使用这项近 500 种位于线粒体基质中的蛋白质。2015 年，MIC 等[74]成功利纤毛的蛋白质谱，意外地在纤毛里发现了信号分子 PKA、AMPK用蛋白质谱方法阐明纤毛突变株 ift27/Bbs19 的分子缺陷。该项技究蛋白质之间互作提供了有力的工具，可以真实地反映活细胞内蛋用，而且操作过程简单，易于掌握。2018 年，就有研究者通-FGF1 融合蛋白标记揭示了 FGFF1 与蛋白多糖 CD44 和 CSPG4 的
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达SLC9A3R1对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响[J]. 马强,闫姗姗,樊赛军,宋娜玲. 肿瘤防治研究. 2014(08)
[2]人肝细胞肝癌组织中CLDN1和CLDN4的表达差异及其作用分析[J]. 谷渊,邝继孙,赵龙栓. 医药论坛杂志. 2012(06)
硕士论文
[1]CLDN4在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用[D]. 汪晓飞.山东农业大学 2015
本文编号：3219093
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PEDV基因组结构示意图
图 1-2 PEDV 基因组复制[[45]Figure 1-2 The replication of PEDV[45]1.2 冠状病毒 M 蛋白的研究进展冠状病毒感染细胞后，病毒蛋白不仅通过阻断一条或多条蛋白的干扰素和NF-κB 信号通路增强病毒的复制[46,47]，而且通过不同的路径和靶点拮抗先天性免疫应答[46]，导致细胞转录模式、细胞循环周期、凋亡途径等发生改变[48]。M 蛋白是冠状病毒的主要结构蛋白之一，属于膜糖蛋白，具有高度保守的糖基化序列，它在病毒和宿主细胞之间的互作过程中发挥重要作用[49]。M 蛋白含有三个跨膜结构域，从 N 端开始依次为 TM1、TM2 和 TM3，主要聚集在高尔基体复合物，通过与 S 蛋白和 N 蛋白的相互作用参与病毒的组装[50]，负责将病毒 RNA 包装成成熟的病毒粒子。在病毒装配期间将核衣壳连接到囊膜上，决定病毒粒子的装配位点、病毒成熟及出芽位点[51]。病毒感染、复制期间，宿主的先天性免疫应答是抗病毒的第一道屏障，在冠状病毒蛋白拮抗宿主的先天性免疫应答研究中，M 蛋白是近几年研究的热点之一。SARS-CoV 结构蛋白调节细胞功能的研究显示，M 蛋白比 N 蛋白更能有效
上海海洋大学硕士学位论文12 年， Roux 等[71]建立了 BioID 方法，利用 biotin ligase 在细胞内白有相互作用的附近的蛋白。但是，biotin ligase 标记的周期长导较大，以致检测到一些不相关的蛋白。2014 年，Alice YTing[72,7工程改造的抗坏血酸过氧化物酶（APEX2）在底物生物素苯酚作 1 毫秒的短暂时间标记细胞中小于 20 纳米半径区域内所有的蛋白谱鉴定标记的蛋白质，该项技术的原理见图 1-3。该团队使用这项近 500 种位于线粒体基质中的蛋白质。2015 年，MIC 等[74]成功利纤毛的蛋白质谱，意外地在纤毛里发现了信号分子 PKA、AMPK用蛋白质谱方法阐明纤毛突变株 ift27/Bbs19 的分子缺陷。该项技究蛋白质之间互作提供了有力的工具，可以真实地反映活细胞内蛋用，而且操作过程简单，易于掌握。2018 年，就有研究者通-FGF1 融合蛋白标记揭示了 FGFF1 与蛋白多糖 CD44 和 CSPG4 的
【参考文献】：
期刊论文
[1]过表达SLC9A3R1对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响[J]. 马强,闫姗姗,樊赛军,宋娜玲. 肿瘤防治研究. 2014(08)
[2]人肝细胞肝癌组织中CLDN1和CLDN4的表达差异及其作用分析[J]. 谷渊,邝继孙,赵龙栓. 医药论坛杂志. 2012(06)
硕士论文
[1]CLDN4在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用[D]. 汪晓飞.山东农业大学 2015
本文编号：3219093
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