猪内脂素重组蛋白溶液中内毒素的去除

发布时间：2021-06-10 08:00

　　本试验旨在探索4℃条件下蛋白的上样体积、流速和蛋白浓度对猪内脂素重组蛋白溶液中内毒素的去除效果和蛋白损失量的影响。该研究采用商品化、修饰过的多黏菌素B为介质,特异性地去除蛋白溶液中的内毒素。在4℃条件下,选用不同的上样体积（6、8、10、12 mL）、流速（0.125～0.75 mL/min）和蛋白浓度（0.9、1.2、1.3、1.7 mg/mL）进行内毒素的去除,使用内毒素检测试剂盒定量测定内毒素含量,使用BCA蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白浓度的测定。试验结果表明:在4℃条件下,蛋白上样体积12 mL、流速0.125～0.25 mL/min时,内毒素的去除效果最佳,去除率高达99.5%,内毒素的残余量（1 EU/mL）在生物安全范围以内,并且蛋白的回收率高达90～95%。试验结果证明成功去除猪内脂素重组蛋白溶液中的内毒素,为该蛋白的相关功能研究和临床应用提供参考。 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(12)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

内毒素检测试剂标准曲线

内毒素去除效果

4 ℃条件下,上样体积为6～9 mL时,蛋白溶液中的内毒素含量增加,而当上样体积超过此范围时,蛋白溶液中内毒素的含量随着上样体积的增加呈现下降的趋势,在达到层析柱最大容量12 mL时内毒素含量最少。上样体积为6～9 mL时,蛋白的损失量降低,之后随着上样体积的增加,蛋白损失量先升高后降低,层析柱最大容量12 mL时蛋白损失率与9 mL时的蛋白损失率相近(图3、4)。当层析柱中的蛋白流干后,加5 mL平衡液洗脱残留在层析柱上的蛋白,残留蛋白洗脱率可高达90%以上。不同上样体积的蛋白流干后,加相同体积的平衡液洗脱残留蛋白,上样体积越大,洗脱后的残留蛋白的内毒素含量越低(图5、6)。图4 上样体积对蛋白损失量的影响

【参考文献】：
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本文编号：3222001