鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭甲型肝炎病毒1型和3型一步法多重RT-PCR检测方法的建立及其应用
发布时间：2021-06-10 20:59
鸭坦布苏病毒（Duck tembusu virus,DTMUV）、鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）、鸭甲型肝炎病毒（Duck hepatitis A virus,DHAV）血清1型（DHAV-1）和3型（DHAV-3）均为危害养鸭业发展的重要病毒性病原,为了快速检测这几种病毒。本研究建立了DTMUV、DPV、DHAV-1和DHAV-3的一步法多重RTPCR检测方法,并对该方法的灵敏度、特异性和重复性等要素进行评估,并将建立的方法应用于病料的鉴别诊断,结果如下:1.DTMUV、DPV、DHAV-1和DHAV-3一步法多重RT-PCR检测方法的建立根据DTMUV、DPV、DHAV-1和DHAV-3在GenBank上全基因组保守序列设计四对引物,以4种病毒的核酸为模板,通过对反应退火温度和引物浓度等条件进行优化,建立了一步法多重RT-PCR方法,分别能扩增出322bp、804bp、648bp和1314bp的目的片段。特异性试验结果显示:以鸭乙肝病毒、禽流感病毒、鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和健康鸭脾脏组织为模板的扩增结果均为...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单一RT-PCR的扩增
观察每个反应最佳退火温度，结果如图2 所示，DHAV-3 在退火温度为 55.3℃时，条带最明显，DPV 和 DHAV-1 在涌道 1~8均清晰，未见明显差异，DTMUV 在退火温度为 57.5 ℃时，反应条带效果最佳。图 2 单一 RT-PCR 的退火温度优化Fig.2 Optimization of annealing temperature for the single RT-PCRM 泳道：DL2000 Marker；泳道 1~8 的反应退火温度分别为：泳道 1：51.0℃；泳道 2：51.5℃；泳道 3：52.3℃；泳道 4：53.7℃；泳道 5：55.3℃；泳道 6：56.6℃；泳道 7：57.5℃；泳道 8：58.0℃Lane M: DL2000 Marker; Lane 1: 51.0℃; Lane 2: 51.5℃; Lane 3: 52.3℃; Lane 4: 53.7℃; Lane 5:55
.3 一步法多重 RT-PCR 反应退火温度优化结果参考单一 RT-PCR 的退火温度的结果选择六个退火温度（51.5℃，52.3℃，53.75.3℃，56.6℃，57.5℃）进行试验，从六种退火温度下的反应结果可以看出，在参考 Tm 值的退火温度的六个退火温度下均可见四条清晰的特异性条带，对于多T-PCR 的影响不算特别大，综合所有条带分析，在退火温度为 55.3 ℃和 56.6 ℃带最清晰。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭甲肝病毒3型在人工感染雏鸭体内分布与诱导肝病变及细胞因子表达的关联性分析[J]. 朱玉东,汪铭书,程安春,朱德康,贾仁勇,刘马峰,陈舜,赵新新,杨乔,吴英,陈孝跃. 畜牧兽医学报. 2018(01)
[2]鸭瘟病毒的分离与初步鉴定[J]. 程晓霞,林锋强,黄梅清,肖世峰,江斌,吴南洋,陈少莺,俞伏松. 福建农业学报. 2017(08)
[3]7种猪呼吸道综合征疾病病原多重PCR方法的建立[J]. 任梅渗,冷依伊,蒙正群,张鹏飞,杨泽晓,姚学萍,王印. 中国农业大学学报. 2017(07)
[4]鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 王永娟,董亚青,郭方超,左伟勇. 黑龙江畜牧兽医. 2017(10)
[5]猪瘟和猪伪狂犬野毒与其疫苗株多重PCR鉴别方法的建立[J]. 李达,马萍,汤德元,张元鑫,张华,曾智勇,刘霞,王洪光,韦冠东. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[6]一例雏番鸭感染鸭1型甲肝病毒的诊断[J]. 卢荣辉,刘小龙,肖隆华,胡小榕,祁保民. 福建畜牧兽医. 2017(01)
[7]中国部分地区鸭、鹅携带四种病毒状况的调查与分析[J]. 刘洋,王传彬,霍斯琪,翟新验,辛盛鹏,刘玉良,韩雪,张倩,杨卫铮,顾小雪. 畜牧兽医学报. 2016(08)
[8]Multiplex PCR Assay Establishment for Detection of H5,H9 Subtypes Avian Influenza Virus and Duck Tembusu Virus[J]. Tang Weiguo,Li Haiqin,Fu Guanghua,Huang Yu,Wei Qipeng. Animal Husbandry and Feed Science. 2016(01)
[9]检测鸭甲型肝炎病毒3型的免疫组织化学方法的建立和应用[J]. 柯晨,程安春,汪铭书,贾仁勇,朱德康,陈舜,刘马峰,刘菲,杨乔,孙昆峰. 中国兽医科学. 2015(10)
[10]我国水禽疫病的流行情况及防控对策[J]. 顾小雪,刘洋,马苏,刘玉良,孙晓东,韩雪,张倩,杨卫铮,王传彬. 中国家禽. 2015(16)
硕士论文
[1]Ⅰ型鸭肝炎病毒环介导等温扩增检测方法的建立及其在临床上的初步应用[D]. 胡成.扬州大学 2016
[2]1型和3型鸭甲肝病毒在临床死亡雏鸭体内分布的研究[D]. 林少莉.山东农业大学 2015
[3]坦布苏病毒的分离鉴定及荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[D]. 于春梅.山东农业大学 2013
[4]嗜酸菌DNA与RNA同时提取方法的研究[D]. 谢成.中南大学 2012
本文编号：3223113
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
单一RT-PCR的扩增
观察每个反应最佳退火温度，结果如图2 所示，DHAV-3 在退火温度为 55.3℃时，条带最明显，DPV 和 DHAV-1 在涌道 1~8均清晰，未见明显差异，DTMUV 在退火温度为 57.5 ℃时，反应条带效果最佳。图 2 单一 RT-PCR 的退火温度优化Fig.2 Optimization of annealing temperature for the single RT-PCRM 泳道：DL2000 Marker；泳道 1~8 的反应退火温度分别为：泳道 1：51.0℃；泳道 2：51.5℃；泳道 3：52.3℃；泳道 4：53.7℃；泳道 5：55.3℃；泳道 6：56.6℃；泳道 7：57.5℃；泳道 8：58.0℃Lane M: DL2000 Marker; Lane 1: 51.0℃; Lane 2: 51.5℃; Lane 3: 52.3℃; Lane 4: 53.7℃; Lane 5:55
.3 一步法多重 RT-PCR 反应退火温度优化结果参考单一 RT-PCR 的退火温度的结果选择六个退火温度（51.5℃，52.3℃，53.75.3℃，56.6℃，57.5℃）进行试验，从六种退火温度下的反应结果可以看出，在参考 Tm 值的退火温度的六个退火温度下均可见四条清晰的特异性条带，对于多T-PCR 的影响不算特别大，综合所有条带分析，在退火温度为 55.3 ℃和 56.6 ℃带最清晰。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭甲肝病毒3型在人工感染雏鸭体内分布与诱导肝病变及细胞因子表达的关联性分析[J]. 朱玉东,汪铭书,程安春,朱德康,贾仁勇,刘马峰,陈舜,赵新新,杨乔,吴英,陈孝跃. 畜牧兽医学报. 2018(01)
[2]鸭瘟病毒的分离与初步鉴定[J]. 程晓霞,林锋强,黄梅清,肖世峰,江斌,吴南洋,陈少莺,俞伏松. 福建农业学报. 2017(08)
[3]7种猪呼吸道综合征疾病病原多重PCR方法的建立[J]. 任梅渗,冷依伊,蒙正群,张鹏飞,杨泽晓,姚学萍,王印. 中国农业大学学报. 2017(07)
[4]鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 王永娟,董亚青,郭方超,左伟勇. 黑龙江畜牧兽医. 2017(10)
[5]猪瘟和猪伪狂犬野毒与其疫苗株多重PCR鉴别方法的建立[J]. 李达,马萍,汤德元,张元鑫,张华,曾智勇,刘霞,王洪光,韦冠东. 中国预防兽医学报. 2017(02)
[6]一例雏番鸭感染鸭1型甲肝病毒的诊断[J]. 卢荣辉,刘小龙,肖隆华,胡小榕,祁保民. 福建畜牧兽医. 2017(01)
[7]中国部分地区鸭、鹅携带四种病毒状况的调查与分析[J]. 刘洋,王传彬,霍斯琪,翟新验,辛盛鹏,刘玉良,韩雪,张倩,杨卫铮,顾小雪. 畜牧兽医学报. 2016(08)
[8]Multiplex PCR Assay Establishment for Detection of H5,H9 Subtypes Avian Influenza Virus and Duck Tembusu Virus[J]. Tang Weiguo,Li Haiqin,Fu Guanghua,Huang Yu,Wei Qipeng. Animal Husbandry and Feed Science. 2016(01)
[9]检测鸭甲型肝炎病毒3型的免疫组织化学方法的建立和应用[J]. 柯晨,程安春,汪铭书,贾仁勇,朱德康,陈舜,刘马峰,刘菲,杨乔,孙昆峰. 中国兽医科学. 2015(10)
[10]我国水禽疫病的流行情况及防控对策[J]. 顾小雪,刘洋,马苏,刘玉良,孙晓东,韩雪,张倩,杨卫铮,王传彬. 中国家禽. 2015(16)
硕士论文
[1]Ⅰ型鸭肝炎病毒环介导等温扩增检测方法的建立及其在临床上的初步应用[D]. 胡成.扬州大学 2016
[2]1型和3型鸭甲肝病毒在临床死亡雏鸭体内分布的研究[D]. 林少莉.山东农业大学 2015
[3]坦布苏病毒的分离鉴定及荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用[D]. 于春梅.山东农业大学 2013
[4]嗜酸菌DNA与RNA同时提取方法的研究[D]. 谢成.中南大学 2012
本文编号：3223113
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