水貂阿留申病乳胶凝集试验抗体检测方法的建立及应用
发布时间：2021-06-13 18:43
水貂阿留申病（Aleutian disease of mink,AD）,由阿留申病毒（Aleutian disease virus,ADV）引起的进行性传染病。该病不仅能够导致貂群的繁殖能力下降,而且还能引起成年水貂消瘦、皮张质量降低等问题,使特种养殖行业承受了巨大的经济损失,严重阻碍了我国毛皮行业的健康发展。目前公认的办法是通过检测来逐步淘汰病貂、弱貂,以达到净化貂群的作用。ADV特异性抗体检测是诊断该病的最有效途径,对流免疫电泳技术（Convection immune electrophoresis,CIEP）是ADV血清抗体检测方法之一,但该方法操作过程比较繁琐,检测时间相对较长,加之需要特定仪器设备,在临床应用上受到了一定的阻碍。因此,建立一种准确率高、省时高效的水貂阿留申病检测方法势在必行。本研究将实验室前期设计并串联表达的水貂阿留申病毒抗原表位（简称抗原肽-SD）与羧基化聚苯乙烯微球共价偶联,制备抗原肽-SD微球复合物,建立了检测水貂阿留申病血清中特异性抗体的乳胶微球凝集试验方法。结果表明,制备抗原肽-SD微球复合物的最佳条件为:羧基化聚苯乙烯微球以EDC为活化剂、活化时间...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
水溶性碳化二亚胺法示意图（引自宋欣明，1993）
图 1.1 重组 SD 蛋白表达的 SDS-PAGE 结果L15000 marker; 1：空白对照; 2：纯化前; 3：SD 蛋白流 第一次洗除杂蛋白; 5：30 mM 第五次洗除杂蛋白; 6：ig 1.1 SDS-PAGE results of recombinant SD protein exp00 Marker; 1: Blank control; 2: Prepurification; 3: SD profirst wash impurity protein; 5: 30mM 5th times wash impu6: Target protein肽-SD 的浓度测定A 蛋白试剂盒操作说明，测定重组蛋白浓度为 5mg/m化聚苯乙烯微球最佳活化剂种类的确定时间为 30min、蛋白浓度为 1mg/ml、EDC 活化剂组、N
剂及不同活化剂组合对抗原肽-SD 微球复合物（* p＜0.05; ** p＜0.01; *** p＜0.001）f no activator and different activators on couplinpeptide-SD microsphere complex(* p＜0.05; ** p＜0.01; *** p＜0.001)苯乙烯微球最佳活化时间的选择结果 1 mg/ml，EDC 活化剂浓度为 100 ug/ml，偶联冲液体系中，选取了 6 个活化时间点（5 min、和 50 min），研究了不同活化时间对抗原肽-S图 1.3 所示，活化时间为 30min 时，偶联率具有显著差异（*p＜0.05），活化时间为 30m试验选用 30 min 作为最佳活化时间。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡白痢沙门氏菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制及初步应用[J]. 刘志科,杨宁宁,徐明国,荆明龙,曹旭东,陈创夫. 河南科技学院学报(自然科学版). 2018(01)
[2]水貂阿留申病胶体金免疫层析试纸条与对流免疫电泳对比试验[J]. 刘洁,李伟,任二军,刘进军,韩学良. 今日畜牧兽医. 2018(01)
[3]水貂阿留申病的诊断方法[J]. 梁宇祥. 畜牧兽医科技信息. 2017(09)
[4]水貂阿留申病碘凝集与对流免疫电泳检测方法比较[J]. 任二军,刘洁,刘进军,韩学良. 经济动物学报. 2017(03)
[5]乳胶凝集试验快速检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的研究[J]. 罗玲,罗青平,温国元,王红琳,汪宏才,张腾飞,艾地云,卢琴,张蓉蓉,邵华斌. 中国家禽. 2017(06)
[6]水貂阿留申病抗体检测技术研究及应用进展[J]. 万洪理,冯二凯,吴洪超,杨艳玲,倪佳,陈立志. 病毒学报. 2015(01)
[7]乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌性脑膜炎早期诊断价值[J]. 叶琳,张齐龙. 中国医学装备. 2014(S1)
[8]水貂阿留申病研究进展[J]. 张庆明,王玉平,雷连成. 河北科技师范学院学报. 2011(04)
[9]水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用[J]. 徐磊,闫喜军,张蕾,柴秀丽,赵建军,张海玲,高晗,白雪. 中国农学通报. 2010(08)
[10]荧光微球的制备技术及其应用进展[J]. 张荣荣,徐自力. 高分子通报. 2009(01)
博士论文
[1]纳米免疫微球的制备、表征及在免疫层析检测中的应用研究[D]. 彭运平.华南理工大学 2013
硕士论文
[1]引物和探针核苷酸错配对PCR灵敏度和特异性影响的研究[D]. 黄可.扬州大学 2017
[2]微流体免疫技术在动物源性食品安全检测中的应用研究[D]. 陈启龙.北京化工大学 2015
[3]水貂阿留申病毒NS1基因的分段原核表达及免疫原性研究[D]. 刘红娜.吉林农业大学 2014
[4]乳胶凝集试验、间接ELISA诊断鸭病毒性肝炎方法的建立[D]. 刘利芳.福建农林大学 2008
[5]养殖水貂阿留申病感染情况及分子流行病学的研究[D]. 马建.东北林业大学 2005
本文编号：3228107
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
水溶性碳化二亚胺法示意图（引自宋欣明，1993）
图 1.1 重组 SD 蛋白表达的 SDS-PAGE 结果L15000 marker; 1：空白对照; 2：纯化前; 3：SD 蛋白流 第一次洗除杂蛋白; 5：30 mM 第五次洗除杂蛋白; 6：ig 1.1 SDS-PAGE results of recombinant SD protein exp00 Marker; 1: Blank control; 2: Prepurification; 3: SD profirst wash impurity protein; 5: 30mM 5th times wash impu6: Target protein肽-SD 的浓度测定A 蛋白试剂盒操作说明，测定重组蛋白浓度为 5mg/m化聚苯乙烯微球最佳活化剂种类的确定时间为 30min、蛋白浓度为 1mg/ml、EDC 活化剂组、N
剂及不同活化剂组合对抗原肽-SD 微球复合物（* p＜0.05; ** p＜0.01; *** p＜0.001）f no activator and different activators on couplinpeptide-SD microsphere complex(* p＜0.05; ** p＜0.01; *** p＜0.001)苯乙烯微球最佳活化时间的选择结果 1 mg/ml，EDC 活化剂浓度为 100 ug/ml，偶联冲液体系中，选取了 6 个活化时间点（5 min、和 50 min），研究了不同活化时间对抗原肽-S图 1.3 所示，活化时间为 30min 时，偶联率具有显著差异（*p＜0.05），活化时间为 30m试验选用 30 min 作为最佳活化时间。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡白痢沙门氏菌胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制及初步应用[J]. 刘志科,杨宁宁,徐明国,荆明龙,曹旭东,陈创夫. 河南科技学院学报(自然科学版). 2018(01)
[2]水貂阿留申病胶体金免疫层析试纸条与对流免疫电泳对比试验[J]. 刘洁,李伟,任二军,刘进军,韩学良. 今日畜牧兽医. 2018(01)
[3]水貂阿留申病的诊断方法[J]. 梁宇祥. 畜牧兽医科技信息. 2017(09)
[4]水貂阿留申病碘凝集与对流免疫电泳检测方法比较[J]. 任二军,刘洁,刘进军,韩学良. 经济动物学报. 2017(03)
[5]乳胶凝集试验快速检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的研究[J]. 罗玲,罗青平,温国元,王红琳,汪宏才,张腾飞,艾地云,卢琴,张蓉蓉,邵华斌. 中国家禽. 2017(06)
[6]水貂阿留申病抗体检测技术研究及应用进展[J]. 万洪理,冯二凯,吴洪超,杨艳玲,倪佳,陈立志. 病毒学报. 2015(01)
[7]乳胶凝集法检测隐球菌荚膜多糖抗原在隐球菌性脑膜炎早期诊断价值[J]. 叶琳,张齐龙. 中国医学装备. 2014(S1)
[8]水貂阿留申病研究进展[J]. 张庆明,王玉平,雷连成. 河北科技师范学院学报. 2011(04)
[9]水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用[J]. 徐磊,闫喜军,张蕾,柴秀丽,赵建军,张海玲,高晗,白雪. 中国农学通报. 2010(08)
[10]荧光微球的制备技术及其应用进展[J]. 张荣荣,徐自力. 高分子通报. 2009(01)
博士论文
[1]纳米免疫微球的制备、表征及在免疫层析检测中的应用研究[D]. 彭运平.华南理工大学 2013
硕士论文
[1]引物和探针核苷酸错配对PCR灵敏度和特异性影响的研究[D]. 黄可.扬州大学 2017
[2]微流体免疫技术在动物源性食品安全检测中的应用研究[D]. 陈启龙.北京化工大学 2015
[3]水貂阿留申病毒NS1基因的分段原核表达及免疫原性研究[D]. 刘红娜.吉林农业大学 2014
[4]乳胶凝集试验、间接ELISA诊断鸭病毒性肝炎方法的建立[D]. 刘利芳.福建农林大学 2008
[5]养殖水貂阿留申病感染情况及分子流行病学的研究[D]. 马建.东北林业大学 2005
本文编号：3228107
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