猪急性腹泻综合征病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2021-06-13 18:56

　　为建立一种鉴定猪急性腹泻综合征病毒（SADS-CoV）的RT-PCR方法,根据NCBI登录的SADS-CoV N基因保守区域序列,设计了3对引物（P1、P2和P3）,通过对SADS-CoV及其他6种病毒进行检测,筛选出最合适的引物,然后对退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、rTaq DNA聚合酶浓度和循环次数等反应条件进行了优化。结果显示,P3引物对SADS-CoV特异性最好,与其他病毒无交叉反应。敏感性试验显示,该方法最低检测限可达9.55×10² copies/μL;重复性试验显示该方法重复性良好。运用建立的RT-PCR方法,对广东省的21份临床样品进行检测,结果检出SADS-CoV阳性样品4份,阳性样品的测序结果与其RT-PCR完全一致。结果表明,本研究成功建立了一种鉴定SADS-CoV的RT-PCR方法,且该方法具有检测快速、成本廉价、特异性强、敏感性高和重复性好的优点,可以用于SADS-CoV的临床诊断。 

【文章来源】：中国动物检疫. 2020,37(11)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

引物特异性鉴定结果

退火温度、引物浓度、r Taq DNA聚合酶和d NTP浓度的优化结果

最佳循环次数优化结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]2018年江西及福建省新现猪急性腹泻冠状病毒的分子流行病学调查[J]. 张誉瀚,袁为锋,张帆帆,李凯,李指全,宋德平,唐玉新.  养猪. 2019(04)
[2]猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及临床应用[J]. 王黎,李碧,周远成,朱玲,徐志文,郭万柱.  中国兽医学报. 2015(02)



本文编号：3228128