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淋巴细胞活化基因3突变体库的制备、筛选及鉴定

发布时间:2021-06-16 16:16
  淋巴细胞活化基因3(Lymphocyte activation gene-3,LAG-3),在活化的T细胞和自然杀伤细胞有选择性表达。是一种对T细胞具有负调节作用的细胞表面分子蛋白。LAG-3作为一种可溶性分子,通过MHCⅡ类信号激活抗原提呈细胞,导致体内抗原特异性T细胞应答增加。最新研究显示FGL1/LAG-3是新的免疫抑制通路,通过抑制FGL LAG-3通路能够让T细胞重新恢复细胞毒性作用,从而限制肿瘤的生长。本试验通过定点突变方法,将LAG-3基因经过三轮PCR扩增得到LAG-3突变基因,将得到的LAG-3突变体基因与载体pCANTAB5E载体连接,将其转化入Ecoli TG1感受态细胞,构建LAG-3突变体库。利用FGL1蛋白包被固相载体,对LAG-3突变体库经过三轮的富集,phage ELISA法筛选到16个阳性克隆,选择其中一个阳性值最高的LAG-3M59进行了表达和鉴定。一:将LAG-3基因和LAG-3突变体基因(LAG-3M59)分别与载体pCANTAB5E连接,将其转化入E.coli TG1感受态细胞中,利用辅助噬菌体M13K07包装后,通过FGL1包被固相载体,采用... 

【文章来源】:内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】:47 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

淋巴细胞活化基因3突变体库的制备、筛选及鉴定


图2?PCR—轮扩增结果??

突变体,产物,菌落,电泳


16?淋巴细胞活化基因3突变体库的制备、筛选及鉴定???2000bp—Hm:*L?'^v^?;r?5-1?'??*s?,,?"?'cl:??1000bp-B^-tS%?-^i:?^?.?:.^?^?:=?£??75〇bp—二.'…興:;署:??500bp—??250bp-??,■■■??图3?PCR二轮扩增结果??Fig.3?PCR?third?round?of?amplification??laneM:?DL2000?Marker,?Lanel_4:?PCR?二轮扩增??以PCR—轮扩增胶回收产物为模板,使用LAGF和LAGR2为引物,进行PCR??扩增,扩增后的产物进行电泳检测,获得417?bp左右的目的条带。结果如图3所示。???M?1?2???2000bp—B??lOOObp—■?r?,??750bp—??5D0bp?—??250bp—■、:?Hq??100bp—■巧::_^?馨:::■?1?’??图4?PCR三轮扩增结果??Fig.4?PCR?fourth?round?of?amplification??laneM:?DL2000?Marker,?Lanel-2:?PCR?三轮扩增??以PCR二轮扩增胶回收产物为模板,使用LAGF和LAGR3引物,进行PCR扩??增,扩増后的产物进行电泳检测,获得450?bp左右的目的条带。结果如图4所示。??2.3.2?LAG-3噬菌体突变体库菌落鉴定结果??M?1?2?3?4?5?6?7?8?9?10?11?12?13?14?15?16?17?18?19?20??图5突变体库菌落鉴定??Fig.5?Mutant?libra

突变体,菌落,产物,电泳


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【参考文献】:
期刊论文
[1]淋巴细胞激活基因-3在头颈部肿瘤免疫治疗的研究进展[J]. 朱晓可,陶磊.  中国眼耳鼻喉科杂志. 2019(06)
[2]诺贝尔奖里的健康密码[J]. 芮晓鸥.  中国金融家. 2018(11)
[3]运用抗PD-L1抗体治疗晚期癌症患者的安全性与疗效评价[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  肿瘤药学. 2012(03)

硕士论文
[1]从噬菌体肽库中筛选具抗前列腺癌功能的新型FGF8b结合肽[D]. 王文慧.暨南大学 2013



本文编号:3233387

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