牛病毒性腹泻/粘膜病ELISA方法的建立及血清学调查

发布时间：2021-06-16 21:46

　　牛病毒性腹泻病毒（BVDV）为黄病毒科，瘟病毒属成员，是一种在世界范围内对造成家畜健康严重危害的病原。该病能引起患畜高热、鼻内粘膜及口腔出血或产生大量粘液、母牛奶量减少甚至停止产奶、怀孕母牛流产或产死胎、畸形胎等症状。牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒和羊边界病毒在血清学上有交叉反应。目前为止，还没有有效的预防和控制BVDV的措施。建立高效快速的检测方法，对于该病的早发现、早防制具有重要作用。本研究以纯化的BVDV为包被抗原，建立了检测BVD血清抗体的间接ELISA检测方法。经优化选择，确定了ELISA最佳工作条件：包被液为磷酸盐缓冲溶液，4℃包被过夜；包被抗原稀释度为1:200，4℃孵育过夜；封闭液为5%脱脂奶粉，37℃封闭2h；被检血清稀释度为1:100，37℃孵育1h；HRP标记兔抗牛IgG稀释度为1:10000，37℃孵育30min，阴阳性界限值为0.320。试验结果表明，建立的牛病毒性腹泻病血清抗体ELISA检测方法具有特异性高、灵敏性好、变异性小的优点，与国外试剂盒相比符合率为91.3%。总之，本研究建立的牛病毒性腹泻病抗体ELISA检测方法，为新疆地区牛病毒性腹泻的监控奠定了基础... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：37 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
    1.1 BVDV 的生物学特性
        1.1.1 BVDV 的病原学特征
        1.1.2 BVDV 的分型
    1.2 BVDV 的基因组和编码蛋白
        1.2.1 BVDV 的基因组结构
        1.2.2 BVDV 编码的结构蛋白
    1.3 BVDV 国内外流行现状
        1.3.1 国外流行现状
        1.3.2 国内流行现状
    1.4 临床症状
    1.5 检测方法
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 牛病毒性腹泻全病毒包被的 ELISA 检测方法的建立
    2.1 实验材料
        2.1.1 病毒株与细胞
        2.1.2 血清及抗体
        2.1.3 主要试剂、耗材
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 病毒的增殖和纯化
        2.2.2 ELISA 条件的优化
        2.2.3 交叉反应试验
        2.2.4 敏感性试验
        2.2.5 重复性试验
        2.2.6 与同类商品化试剂盒的对比
        2.2.7 临床样品的检测
    2.3 实验结果
        2.3.1 病毒的浓度测定结果
        2.3.2 间接 ELISA 检测方法最佳工作条件的确定结果
        2.3.3 交叉反应试验结果
        2.3.4 灵敏性试验结果
        2.3.5 重复性试验
        2.3.6 与商品化试剂盒的比较试验结果
        2.3.7 临床样品的检测
    2.4 讨论
第三章 结论
参考文献
致谢
作者简介及在学成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]北京地区规模化奶牛场三种病毒性腹泻病的血清学调查[J]. 傅彩霞,靳兴军,郑瑞峰,郭峰,韩磊,李佳,吴惠明,王玉田,张跃,杜鹃.  动物医学进展. 2012(05)
[2]牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测[J]. 王文,张娟,员丽娟,季新成.  动物医学进展. 2011(09)
[3]黑龙江省部分奶牛场牛病毒性腹泻病毒感染的血清学调查[J]. 魏伟,李岩,刘长军,万培明,王君伟.  中国兽医科学. 2009(06)
[4]基因2型牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立和初步应用[J]. 任敏,焦海宏,蒋颖,刘振华,王传彬,朱国强.  中国预防兽医学报. 2008(09)
[5]猪源牛病毒性腹泻病毒的流行初探[J]. 宋永峰,张志,张燕霞,吴发兴,李晓成.  中国动物检疫. 2008(07)
[6]奶牛病毒性腹泻病的血清学调查[J]. 金爱华,卫秀余,沈强,余红梅,方桂明,吴文辉.  上海畜牧兽医通讯. 2008(03)
[7]牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法研究[J]. 高存福,秦建华,赵月兰,左玉柱,包永占,李艳琴.  中国农学通报. 2007(03)
[8]牛病毒性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 高存福,秦建华,赵月兰,包永占,张宁.  中国兽医科技. 2005(08)
[9]梅花鹿牛病毒性腹泻病毒的分离及其RT-PCR鉴定[J]. 郜玉钢,郑全,杜锐,王全凯,王树志.  经济动物学报. 2004(02)
[10]牦牛病毒性腹泻粘膜病的诊断和防制[J]. 舒展,卢旺银,陈轶霞.  中国兽医科技. 2001(04)

博士论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒分子生物学检测技术研究[D]. 季新成.西北农林科技大学 2010

硕士论文
[1]基因2型牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定[D]. 任敏.新疆农业大学 2007



本文编号：3233847