犬乳腺肿瘤细胞周期同步化研究及紫杉醇对周期相关因子的影响

发布时间：2021-06-17 00:45

　　犬乳腺肿瘤作为临床上一种常见的疾病,与人乳腺肿瘤有很多相似之处,以其作为模型进行摸索,对人乳腺肿瘤的研究具有重大意义。近年来,对犬乳腺肿瘤细胞虽有研究,并取得了相应成就,但细胞周期同步化与周期调控机理仍有待研究。血清饥饿法和胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法是使细胞同步于特定阶段的有效方法,但该法是否适用于犬乳腺肿瘤细胞至今尚未报道。紫杉醇作为20世纪天然抗肿瘤新药,现已普遍应用于人卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、及黑色素瘤的临床治疗中。其突出的疗效更是引起人们的广泛注意。但是紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞周期及肿瘤相关因子的影响还有待进一步证实。本实验就此一系列问题展开深入研究。实验采用体外培养的犬乳腺肿瘤细胞为研究对象,经0%、0.1%、0.2%、0.5%、1%和10%胎牛血清（FBS）的DMEM分别作用24h、32h、42h和54h,采用光学显微镜观察细胞形态学变化,通过碘化丙啶（PI）染色和流式细胞术检测不同条件下G0/G1期同步化效果。使用2.5mmol/L TdR检测其对犬乳腺肿瘤细胞周期的同步化作用。采用浓度为0.1μmol/L和0.05μmol/L的紫杉醇分别作用24h、48h、72... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 犬乳腺肿瘤研究现状
    1.2 细胞周期同步化
        1.2.1 血清饥饿同步化
        1.2.2 胸腺嘧啶核苷(TdR)同步化
    1.3 紫杉醇
    1.4 细胞周期调控及相关因子
        1.4.1 细胞周期
        1.4.2 细胞周期调控
        1.4.3 细胞周期检验点
        1.4.4 肿瘤细胞周期的缺陷
    1.5 本研究的目的及意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 主要实验器材
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要试剂的配制
        2.1.5 实验前的准备工作
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞的冻存、复苏与传代
        2.2.2 细胞计数
        2.2.3 实验分组设计
        2.2.4 犬乳腺肿瘤细胞的形态学变化
        2.2.5 犬乳腺肿瘤细胞周期同步化的研究
        2.2.6 紫杉醇对细胞周期的影响
        2.2.7 实时荧光定量PCR检测周期相关因子
    2.3 实验数据的分析与统计
3 实验结果
    3.1 犬乳腺肿瘤细胞形态的变化
        3.1.1 血清饥饿对犬乳腺肿瘤细胞形态的影响
        3.1.2 TdR对犬乳腺肿瘤细胞形态的影响
        3.1.3 紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞形态的影响
    3.2 G_0/G_1期同步化结果
    3.3 S、G_2/M期同步化结果
    3.4 紫杉醇作用后细胞周期分布情况
    3.5 P_(27)、P_(53)、BCL-2表达差异的检测结果
        3.5.1 定量标准曲线的建立及溶解曲线的分析
        3.5.2 P27、P53、bcl-2的荧光定量PCR检测结果
4 讨论
    4.1 犬乳腺肿瘤细胞的形态影响
    4.2 血清饥饿及TDR对犬乳腺肿瘤细胞的同步化影响
    4.3 紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞周期的影响
    4.4 紫杉醇对肿瘤相关因子的影响
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]接触抑制和血清饥饿对细胞周期的影响[J]. 任亮,刘娣,付博,房庆昌,郭云云,马红,汪亮,李忠秋,李璐.  黑龙江畜牧兽医. 2012(03)
[2]Cyclin D1与细胞周期调控[J]. 卢梦玲,闫超,赖多,徐汉虹.  生物技术通报. 2011(10)
[3]木脂素对MGC-803胃癌细胞的抗增殖作用及其与细胞周期相关蛋白的相关性[J]. 尹美玉,崔银姬,徐丽,崔雪花,李柱虎.  延边大学医学学报. 2011(03)
[4]细胞周期蛋白G2与肿瘤[J]. 茅锐,王振华.  国际病理科学与临床杂志. 2011(03)
[5]细胞周期与帕金森病[J]. 黄杰,王涛.  中国临床神经科学. 2011(03)
[6]不同浓度紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡的形态学观察[J]. 李华涛,张蓉蓉,任晓丽,陈萌,李响,刘云,冯新畅,唐大木.  中国兽医科学. 2011(04)
[7]AO/EB双重染色法检测紫杉醇体外诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡[J]. 陈萌,李华涛,李响,张蓉蓉,任晓丽,刘云,新畅,唐大木.  广东畜牧兽医科技. 2011(01)
[8]紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响[J]. 李娟,单长民.  中国药师. 2011(02)
[9]周期节律与肿瘤关系的分子机理[J]. 敖翔,李淑晶,伍会健.  中国生物化学与分子生物学报. 2010(11)
[10]曲古抑菌素A对结肠癌细胞细胞周期影响的机制研究[J]. 雷振东,赵华,雷三林,刘奎杰.  中南药学. 2010(11)

硕士论文
[1]紫杉醇抑制犬乳腺肿瘤细胞增殖及相关细胞因子变化的研究[D]. 张荣蓉.东北农业大学 2009
[2]紫杉醇致体外培养犬乳腺肿瘤细胞凋亡形态学及抗氧化功能影响的研究[D]. 任晓丽.东北农业大学 2009
[3]HMME-PDT致犬乳腺肿瘤细胞凋亡相关因子的研究[D]. 马兴乾.东北农业大学 2009
[4]犬乳腺肿瘤转移关联因子及细胞系性状解析[D]. 崔文.东北农业大学 2007



本文编号：3234114