重组猪干扰素α抗猪传染性胃肠炎病毒的研究

发布时间：2021-06-19 12:04

　　干扰素具有广谱的抗病毒和免疫调节活性,在机体抵抗外源病毒性病原的感染中发挥着重要作用。目前己有天然干扰素、原核或真核表达的重组干扰素应用于临床上病毒性疾病的治疗。猪重组干扰素使用大肠杆菌进行可溶性表达,所表达的干扰素具有广谱的抗病毒活性,在多种动物源性的细胞上显示出良好的抗病毒能力。本实验分别使用细胞和动物感染模型测试重组干扰素对猪传染性胃肠炎的疗效,取得了以下进展：1将实验室保存的TGEV SC-T株进行鉴定,然后使用纯净的TGEV SC-T株感染PK15细胞作为细胞感染模型测试重组干扰素对TGEV的抑制作用。结果显示效价约2×104IU的干扰素样品经倍比稀释后处理PK15细胞,并使用TGEV感染细胞,发现在32倍稀释时能够完全抑制TGEV所致的细胞病变,与人干扰素标准品显示出一致的抗病毒能力。通过嗜斑实验发现重组干扰素在32倍稀释时能够完全抑制TGEV病毒嗜斑的形成,在64倍稀释时能够显著抑制TGEV病毒嗜斑的形成。另外使用半定量RT-PCR和Wectern-Blot分别检测预处理细胞感染TGEV后病毒核酸和蛋白的表达情况,结果显示重组干扰素能够显著抑制病毒基因组的复制和TGEV特... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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缩略词
中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 猪干扰素α研究进展
        1.1 猪干扰素α的发现
        1.2 猪干扰素α的分类
        1.3 猪干扰素α的作用机理
            1.3.1 IFN-α发挥作用的信号转导通路
            1.3.2 IFN-α抗病毒作用
            1.3.3 IFN-α免疫调节
            1.3.4 IFN-α抗肿瘤
        1.4 猪干扰素α与病毒感染
        1.5 猪干扰素α的抗病毒研究
            1.5.1 抗伪狂犬病毒的研究
            1.5.2 抗猪传染性胃肠炎病毒的研究
            1.5.3 抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究
            1.5.4 抗口蹄疫病毒的研究
    2 猪传染性胃肠炎研究进展
        2.1 TGEV病原学
        2.2 TGEV感染的临床症状
        2.3 TGEV的防治
    3 本研究的目的和意义
第二章 猪干扰素体外抗TGEV的研究
    1 材料与方法
        1.1 细胞、菌株及病毒株
        1.2 药品
        1.3 试剂
        1.4 细胞培养相关试剂
        1.5 引物
        1.6 病毒增殖
        1.7 病毒株的鉴定
            1.7.1 RT-PCR、基因克隆及测序
            1.7.2 纯净性检测
            1.7.3 理化鉴定
        1.8 病毒毒力测定
        1.9 rPoIFN-α体外抗猪传染性胃肠炎病毒试验
        1.10 rPoIFN-α体外抑制猪传染性胃肠炎病毒增值动力学检测
            1.10.1 空斑形成试验检测猪传染性胃肠炎病毒量
            1.10.2 rPoIFN-α对TGEV滴度的影响
            1.10.3 半定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒基因表达
            1.10.4 Western-blot检测猪传染性胃肠炎病毒蛋白表达
    2 结果
        2.1 病毒增殖
        2.2 RT-PCR鉴定及测序结果
        2.3 纯净性检测结果
            2.3.1 细菌检测结果
        2.4 病毒理化试验
        2.5 病毒毒力测定
        2.6 三批次rPoIFN-α诱导PK-15细胞抗猪传染性胃肠炎病毒效果
        2.7 三批次rPoIFN-α体外抗猪传染性胃肠炎病毒试验病毒增殖动力学检测
            2.7.1 空斑形成试验检测病毒量变化结果
            2.7.2 rPoIFN-α对TGEV滴度的影响
            2.7.3 半定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒基因表达结果
            2.7.4 Western-blot检测猪传染性胃肠炎病毒蛋白表达结果
    3 讨论
第三章 重组干扰素在仔猪体内抑制TGEV的研究
    1 实验材料
        1.1 细胞及病毒
        1.2 实验动物
        1.3 药品及试剂
        1.4 仪器设备
    2 实验方法
        2.1 仔猪人工感染猪传染性胃肠炎病毒感染模型的建立
            2.1.1 攻毒所用病毒液的制备
            2.1.2 动物接种
            2.1.3 临床症状的观察
            2.1.4 病料组织的RT-PCR检测
            2.1.5 病料组织病毒分离
            2.1.6 病理组织学观察
        2.2 三批次重组猪干扰素α在仔猪体内抑制猪传染性胃肠炎病毒的研究
            2.2.1 重组猪干扰素α对猪传染性胃肠炎的最适治疗剂量筛选
                2.2.1.3 病理学检测
            2.2.2 重组猪干扰素α实验室最适治疗时间研究
            2.2.3 三批次干扰素治疗结果检测
    3 实验结果
        3.1 仔猪人工感染猪传染性胃肠炎病毒的建立
            3.1.1 临床特征和剖检观察
            3.1.2 病料组织RT-PCR检测
            3.1.3 病料组织病毒分离结果
            3.1.4 病理组织学变化观察
        3.2 重组猪干扰素α对猪传染性胃肠炎的治疗剂量筛选
            3.2.2 RT-PCR检测
        3.3 重组猪干扰素α实验室最适治疗时间研究
            3.3.1 临床症状分析
            3.3.2 RT-PCR检测
            3.3.3 病理染色检测
        3.4 三批次重组猪干扰素a对仔猪感染猪传染性胃肠炎实验室治疗
            3.4.1 治疗后临床症状观察
            3.4.2 RT-PCR结果
            3.4.3 病理组织学变化观察
    4 结论与讨论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪传染性胃肠炎的诊治[J]. 陈会良.  畜牧与饲料科学. 2009(Z1)
[2]干扰素研究进展[J]. 解希帝,周雨霞.  畜牧与饲料科学. 2008(03)
[3]干扰素-τ的研究进展[J]. 付加雷,宋长征.  药物生物技术. 2006(01)
[4]干扰素的新家族——IFN-λs研究现状[J]. 李珊,李秋艳,陈素华,李云龙.  动物医学进展. 2005(10)
[5]人新型干扰素κ的基因克隆、表达、纯化及其抗病毒活性的初步研究[J]. 张辉,段招军,朱建高,彭夫望,李武平,高寒春,谢志萍,王玉娥,侯云德.  中华实验和临床病毒学杂志. 2005(03)
[6]干扰素-τ对绵羊妊娠识别影响的研究进展[J]. 姜怀志,李雪,马宁.  家畜生态学报. 2005(03)
[7]干扰素研究及其重大突破性研究进展[J]. 刘新垣.  中国处方药. 2004(07)
[8]IFN-τ与妊娠[J]. 靳亚平,王爱华,王建辰.  动物医学进展. 2000(S1)
[9]猪干扰素的某些性质[J]. 罗经,杨学楼.  国外医学(免疫学分册). 1989(05)



本文编号：3237777