鸭疫里氏杆菌06537/06542基因缺失株的构建及其生物学特性研究
发布时间：2021-06-20 21:01
鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）感染是当前危害全球养鸭业的重要传染病之一。目前发现RA至少有21种血清型。但即使是在同一种血清型中,不同来源菌株之间的毒力也存在较大差异。一旦鸭疫里氏杆菌感染鸭群,它可以造成该病的广泛流行且彻底根除十分困难,而且存在反复感染发作的可能性,所以我们急需要一种安全有效的疫苗以预防该病。而目前有关鸭疫里氏杆菌感染的分子致病机理及免疫机制的研究报道较少。运用分子生物学的方法深入研究鸭疫里氏杆菌感染的分子致病机理及免疫机制来预防该病的发生是当前研究的热点。本研究以鸭疫里氏杆菌血清1型云梦株（RA-YM）为亲本株,选取了其中一对双组份调控系统06537/06542为研究对象,通过构建重组自杀性质粒,采用接合转移方法构建了RA-YM株的06537/06542基因缺失株,对该基因缺失株的生物学特性进行了研究,并比较了其与RA-YM亲本株对雏鸭的致病性。取得的主要研究结果如下:1构建了RA-YM 06537/06542基因缺失株根据RA-YM株06537/06542基因的序列,通过重组自杀性质粒p RE112-LSR,利用接合转移同源...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pMD18-T质粒图谱
cript II SK（+），自杀性质粒 pRE112（图 3-2）及宿主菌 保存。观霉素抗性（SpcR）基因 pIC333 质粒由本实验室保存。体的结构示意图如下：图 3-1:pMD18-T 质粒图谱Fig.3-1:Restriction map of pMD18-T
结构 RNA 聚合酶发生相互作用。而在 373bp-462bp 的位置上还有蛋白甘露糖基转移酶结构域。从中可以看出，06542 基因符合反应调控因子 RR 一般结构特点。通过生物信息学分析，发现 06537/06542 是一对分别具有 BaeS 和 OmpR 保守性区域的双组份调控系统。已有的研究报道发现 BaeS 通常与 BaeR 组成一对双组份调控系统，而 OmpR 则通常与 EnvZ 组成一对双组份调控系统，BaeS 和 OmpR 这种组合的双组份系统当前尚无研究报道。而且，06537 基因的 BaeS 保守性区域前还具有一个与细菌 SNF2 解旋酶相关的结构域，这种 SNF2_assoc-HisKA-HATPase_c 的HK 结构域组合当前也未被报道过（附录图 3）。因此，这种新的 HK 结构域组合和新的 TCS 组合对鸭疫里氏杆菌生物学特性和致病性的影响也是后续研究的重点。运用TMHMM 软件对RAYM_06537和RAYM_06542的跨膜螺旋区域进行分析（图 4-1A，图 4-1B），结果发现 RAYM_06537 有两个跨膜区，其中第 1-4 氨基酸位于细胞膜内，第 5-27 氨基酸为跨膜螺旋区，第 28-258 氨基酸在细胞膜外，第259-281 氨基酸为第二个跨膜螺旋区，第 282-514 氨基酸在细胞膜内；RAYM_06542上无跨膜区。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭传染性浆膜炎的诊治[J]. 朱二勇,殷丽霞,王晓春,赵庆远,郑杨,刘翠娥,王本玲. 当代畜禽养殖业. 2015(02)
[2]鸭疫里默氏杆菌的GAPDH同源体:一种有生物活性的胞外蛋白（英文）[J]. Ji-ye GAO,Cui-lian YE,Li-li ZHU,Zhi-ying TIAN,Zhi-bang YANG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2014(09)
[3]假单胞菌碳代谢抑制调控系统各组分的功能及作用机制[J]. 弓湃,尚立国,战嵛华,燕永亮,林敏. 中国农业科技导报. 2014(02)
[4]鸭疫里默氏杆菌强、弱菌株外膜蛋白的比较蛋白质组学研究[J]. 刘燕,韦强,鲍国连,季权安. 生物化学与生物物理进展. 2008(06)
[5]鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白生物学特性研究[J]. 刘燕,韦强,鲍国连,季权安. 生物工程学报. 2008(04)
[6]鸭疫里默氏菌的gyrA基因的检测与变异位点的分析[J]. 刘颖,苏敬良,刘文华. 中国兽医杂志. 2007(01)
[7]鸭疫里默氏菌一个可能新型的鉴定[J]. 张大丙,郑献进,曲丰发. 中国预防兽医学报. 2006(01)
[8]鸭疫里默氏菌16SrDNA基因的PCR-RFLP分析[J]. 曲丰发,张大丙,郑献进,郭玉璞. 中国兽医杂志. 2005(10)
[9]间接免疫组化法检测鸭疫里默氏杆菌感染和抗原定位[J]. 刘维平,程安春,汪铭书,陈孝跃,周毅,朱德康,刘菲,孟琼华,黄诚,宋涌. 中国兽医学报. 2005(04)
[10]PCR法快速检测鸭疫里氏杆菌的研究[J]. 杨建远,邓舜洲,何后军. 江西农业大学学报. 2005(03)
博士论文
[1]A群链球菌CovRS双组份系统致病机制研究[D]. 李锦铨.华中农业大学 2013
[2]双组分调控系统1910HK/RR调控猪链球菌2型致病性研究[D]. 袁芳艳.华中农业大学 2010
[3]谷氨酰胺合成酶GlnA及其转录调节因子GlnR对2型猪链球菌致病力影响的研究[D]. 司有辉.华中农业大学 2009
[4]鸭疫里氏杆菌免疫诊断方法及在感染鸭肝脏差异表达基因的研究[D]. 周祖涛.华中农业大学 2009
[5]鸭疫里默氏杆菌致病相关因子研究[D]. 李继祥.西南大学 2009
[6]二元信号转导系统SalK/SalR调控高致病性2型猪链球菌毒力的实验研究[D]. 李明.第三军医大学 2008
硕士论文
[1]猪链球菌2型双组分信号转导系统NisKR和BceRS对毒力调控的研究[D]. 徐娟.华中农业大学 2014
[2]猪链球菌2型双组份调控系统CiaRH调控基因SSU052036和SSU052039的功能研究[D]. 贾志平.华中农业大学 2014
[3]胸膜肺炎放线杆菌CpxA/R双组份调控系统基因缺失突变株构建及生物学特性研究[D]. 承慧.华中农业大学 2013
[4]胸膜肺炎放线杆菌双组份调控系统QseB/QseC突变株构建功能研究[D]. 胡琳琳.华中农业大学 2011
[5]鸭疫里氏杆菌野生型质粒的分离、序列分析和DPP Ⅳ缺失株的构建[D]. 彭晓娅.华中农业大学 2011
[6]鸭疫里默氏杆菌特异性单克隆抗体的研制以及生物被膜和OmpA缺失株的研究[D]. 周小进.扬州大学 2010
[7]鸭疫里默氏杆菌1型磷酸二酯酶基因的发现及其克隆表达和应用研究[D]. 陈虹.四川农业大学 2008
[8]鸭疫里氏杆菌体内诱导抗原基因的筛选与应用研究[D]. 陈芬芬.华中农业大学 2008
[9]利用SCOTS技术筛选鸭疫里氏杆菌体内外差异表达的基因[D]. 郑娟.华中农业大学 2008
本文编号：3239925
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pMD18-T质粒图谱
cript II SK（+），自杀性质粒 pRE112（图 3-2）及宿主菌 保存。观霉素抗性（SpcR）基因 pIC333 质粒由本实验室保存。体的结构示意图如下：图 3-1:pMD18-T 质粒图谱Fig.3-1:Restriction map of pMD18-T
结构 RNA 聚合酶发生相互作用。而在 373bp-462bp 的位置上还有蛋白甘露糖基转移酶结构域。从中可以看出，06542 基因符合反应调控因子 RR 一般结构特点。通过生物信息学分析，发现 06537/06542 是一对分别具有 BaeS 和 OmpR 保守性区域的双组份调控系统。已有的研究报道发现 BaeS 通常与 BaeR 组成一对双组份调控系统，而 OmpR 则通常与 EnvZ 组成一对双组份调控系统，BaeS 和 OmpR 这种组合的双组份系统当前尚无研究报道。而且，06537 基因的 BaeS 保守性区域前还具有一个与细菌 SNF2 解旋酶相关的结构域，这种 SNF2_assoc-HisKA-HATPase_c 的HK 结构域组合当前也未被报道过（附录图 3）。因此，这种新的 HK 结构域组合和新的 TCS 组合对鸭疫里氏杆菌生物学特性和致病性的影响也是后续研究的重点。运用TMHMM 软件对RAYM_06537和RAYM_06542的跨膜螺旋区域进行分析（图 4-1A，图 4-1B），结果发现 RAYM_06537 有两个跨膜区，其中第 1-4 氨基酸位于细胞膜内，第 5-27 氨基酸为跨膜螺旋区，第 28-258 氨基酸在细胞膜外，第259-281 氨基酸为第二个跨膜螺旋区，第 282-514 氨基酸在细胞膜内；RAYM_06542上无跨膜区。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸭传染性浆膜炎的诊治[J]. 朱二勇,殷丽霞,王晓春,赵庆远,郑杨,刘翠娥,王本玲. 当代畜禽养殖业. 2015(02)
[2]鸭疫里默氏杆菌的GAPDH同源体:一种有生物活性的胞外蛋白（英文）[J]. Ji-ye GAO,Cui-lian YE,Li-li ZHU,Zhi-ying TIAN,Zhi-bang YANG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2014(09)
[3]假单胞菌碳代谢抑制调控系统各组分的功能及作用机制[J]. 弓湃,尚立国,战嵛华,燕永亮,林敏. 中国农业科技导报. 2014(02)
[4]鸭疫里默氏杆菌强、弱菌株外膜蛋白的比较蛋白质组学研究[J]. 刘燕,韦强,鲍国连,季权安. 生物化学与生物物理进展. 2008(06)
[5]鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白生物学特性研究[J]. 刘燕,韦强,鲍国连,季权安. 生物工程学报. 2008(04)
[6]鸭疫里默氏菌的gyrA基因的检测与变异位点的分析[J]. 刘颖,苏敬良,刘文华. 中国兽医杂志. 2007(01)
[7]鸭疫里默氏菌一个可能新型的鉴定[J]. 张大丙,郑献进,曲丰发. 中国预防兽医学报. 2006(01)
[8]鸭疫里默氏菌16SrDNA基因的PCR-RFLP分析[J]. 曲丰发,张大丙,郑献进,郭玉璞. 中国兽医杂志. 2005(10)
[9]间接免疫组化法检测鸭疫里默氏杆菌感染和抗原定位[J]. 刘维平,程安春,汪铭书,陈孝跃,周毅,朱德康,刘菲,孟琼华,黄诚,宋涌. 中国兽医学报. 2005(04)
[10]PCR法快速检测鸭疫里氏杆菌的研究[J]. 杨建远,邓舜洲,何后军. 江西农业大学学报. 2005(03)
博士论文
[1]A群链球菌CovRS双组份系统致病机制研究[D]. 李锦铨.华中农业大学 2013
[2]双组分调控系统1910HK/RR调控猪链球菌2型致病性研究[D]. 袁芳艳.华中农业大学 2010
[3]谷氨酰胺合成酶GlnA及其转录调节因子GlnR对2型猪链球菌致病力影响的研究[D]. 司有辉.华中农业大学 2009
[4]鸭疫里氏杆菌免疫诊断方法及在感染鸭肝脏差异表达基因的研究[D]. 周祖涛.华中农业大学 2009
[5]鸭疫里默氏杆菌致病相关因子研究[D]. 李继祥.西南大学 2009
[6]二元信号转导系统SalK/SalR调控高致病性2型猪链球菌毒力的实验研究[D]. 李明.第三军医大学 2008
硕士论文
[1]猪链球菌2型双组分信号转导系统NisKR和BceRS对毒力调控的研究[D]. 徐娟.华中农业大学 2014
[2]猪链球菌2型双组份调控系统CiaRH调控基因SSU052036和SSU052039的功能研究[D]. 贾志平.华中农业大学 2014
[3]胸膜肺炎放线杆菌CpxA/R双组份调控系统基因缺失突变株构建及生物学特性研究[D]. 承慧.华中农业大学 2013
[4]胸膜肺炎放线杆菌双组份调控系统QseB/QseC突变株构建功能研究[D]. 胡琳琳.华中农业大学 2011
[5]鸭疫里氏杆菌野生型质粒的分离、序列分析和DPP Ⅳ缺失株的构建[D]. 彭晓娅.华中农业大学 2011
[6]鸭疫里默氏杆菌特异性单克隆抗体的研制以及生物被膜和OmpA缺失株的研究[D]. 周小进.扬州大学 2010
[7]鸭疫里默氏杆菌1型磷酸二酯酶基因的发现及其克隆表达和应用研究[D]. 陈虹.四川农业大学 2008
[8]鸭疫里氏杆菌体内诱导抗原基因的筛选与应用研究[D]. 陈芬芬.华中农业大学 2008
[9]利用SCOTS技术筛选鸭疫里氏杆菌体内外差异表达的基因[D]. 郑娟.华中农业大学 2008
本文编号：3239925
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