鸡弱精子症发生的形成因素及其与Piwil1基因的关联研究

发布时间：2021-06-25 01:43

　　目前,家禽业出现繁殖力持续下降,每年商业品种中淘汰10%左右的弱精子症鸡。为探讨公鸡弱精子症的发生机制,本研究通过建立弱精子症人工模型并对正常公鸡和弱精子症公鸡进行精液品质测定、形态学观察；同时通过TaqMan实时荧光定量PCR （Real-Time qPCR, RT-qPCR）法,检测调控精子发生的关键基因-Piwill在不同类型生精细胞内mRNA表达水平,进一步确定该基因在家禽精子发生过程中的功能。实验结果如下：1.利用白消安构建了弱精子症人工模型,与对照组相比,处理组的精液量、精子活率和精子密度随着白消安处理时间的增加而显著降低,而精子畸形率则显著提高。白消安处理7d后,曲精细管上皮开始脱落,处理19d后生精上皮上的精子细胞层和部分精母细胞开始脱落,处理25d后曲精细管上皮只剩下精原细胞层。精液涂片结果显示,对照组和处理组精液密度差异显著（P<0.05）,且处理组的精液密度随着白消安处理时间增加而降低。2.自发弱精子症中,重度弱精子症组精液量和精液密度显著低于其他组；正常组的精子畸形率显著低于弱精子症组,而精子活力则显著高于弱精子症组。正常组公鸡精液密度和中度弱精及重度弱精... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述
    1 Piwi研究进展
        1.1 Piwi的发现
        1.2 Piwi的生物学功能
            1.2.1. Piwi在生殖干细胞维持中的功能
            1.2.2. Piwi在配子发生中的功能
            1.2.3. Piwi在体细胞中的功能
    2 家禽精子发生
        2.1 精子发生
        2.2 精子发生过程
        2.3 睾丸功能结构
        2.4 家禽减数分裂
    3 鸡弱精子症研究现状
    4 精液品质
        4.1 精液品质评定指标
        4.2 精液品质影响因素
    5 流式细胞术
        5.1 流式细胞术发展历史
        5.2 流式细胞术原理及应用
            5.2.1 流式细胞仪系统流程
            5.2.2 流式细胞仪工作原理
        5.3 细胞参量
    6 实时荧光定量PCR
        6.1 RT-qPCR常用检测方法及原理
            6.1.1. SYBR Green染料法
            6.1.2. TaqMan探针法
        6.2 实时荧光定量PCR的几个常用术语
        6.3 实验数据分析方法
    7 本实验的研究目的和意义
第二章 鸡弱精子症人工模型的建立及弱精子症形成因素的初步研究
    1. 引言
    2. 实验材料
        2.1. 实验动物
        2.2. 主要仪器
        2.3. 主要试剂
    3. 实验方法
        3.1. 白消安建立弱精子症人工模型
            3.1.1. 弱精子症模型建立
            3.1.2. 样品采集及数据测定
        3.2. 精液品质测定
            3.2.1. 精液量
            3.2.2. 精子密度
            3.2.3. 精子活力
            3.2.4. 精子活率
            3.2.5. 精子畸形率
        3.3. 形态学分析
            3.3.1. 睾丸石蜡切片制作
            3.3.2. 精液涂片
        3.4. 数据分析
    4. 结果与分析
        4.1. 公鸡饲养情况及毒性观察
        4.2. 精液品质测定
            4.2.1. 自发弱精子症与正常公鸡精液品质比较分析
            4.2.2. 弱精子症模型精液品质比较分析
        4.3. 形态学观察
            4.3.1. 睾丸组织石蜡切片
            4.3.2. 精液涂片
    5. 讨论
第三章 Piwill在不同类型生精细胞中mRNA转录的研究
    1. 引言
    2. 实验材料
        2.1. 实验动物
        2.2. 主要实验仪器
        2.3. 主要实验试剂及配制
    3. 实验方法
        3.1. 鸡生精细胞的分离和鉴定
            3.1.1 鸡原始生殖细胞(PGCs)分离与鉴定
            3.1.2 鸡精原干细胞(SSCs)分离与鉴定
            3.1.3 鸡睾丸内生精细胞分离与鉴定
            3.1.4 鸡成熟精子的纯化
        3.2 总RNA的提取与质量检测
            3.2.1 Trizol法提取总RNA及RNA质量检测
            3.2.2 石蜡切片RNA的提取与质量检测
        3.3 反转录及RT-qPCR
            3.3.1 RNA样品的反转录
            3.3.2 引物的设计与合成
            3.3.3 标准质粒的稀释及拷贝数的计算
            3.3.4 标准曲线的建立
        3.4 RNA样品的检测
    4 实验结果
        4.1 鸡PGCs的鉴定
        4.2 鸡SSCs的鉴定
        4.3 流式细胞分选
            4.3.1 鸡精原(母)细胞
            4.3.2 圆形精细胞
        4.4 纯化的精子细胞
        4.5 TaqMan RT-qPCR
            4.5.1 生精细胞RNA检测的TaqMan RT-qPCR方法标准曲线的建立
            4.5.2 生精细胞RNA的Ct值及绝对拷贝数
            4.5.3. 弱精子症睾丸组织的TaqMan RT-qPCR标准曲线
            4.5.4. 弱精子症Ct值及绝对拷贝数
    5 讨论
全文结论
参考文献
致谢
论文发表目录



本文编号：3248239