弓形虫SAG1和GRA4基因的原核表达及其重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建

发布时间：2021-06-27 19:30

　　弓形虫病（Toxoplasmosis）是由专性细胞内刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）寄生于人和多种动物而引起的一种人兽共患病。它不仅给畜牧业带来了巨大的经济损失,同时造成孕妇的流产、死产等,可垂直传播给胎儿,致使胎儿的先天性疾病；也是造成艾滋病、恶性肿瘤等免疫缺陷患者死亡的重要病因。猫是弓形虫的终末宿主,因此针对猫弓形虫病疫苗的研发显得尤为重要。以病毒为载体的疫苗得到了良好的免疫效果,猫疱疹病毒Ⅰ型（Feline Herpesvirus type1,FHV-1）是一个很好的疫苗候选载体,TK基因是疱疹病毒增殖的非必需基因和主要的毒力基因,允许大容量的外源基因插入和表达。应用RT-PCR方法扩增弓形虫RH株SAG1和GRA4基因,构建了pMD-18T-SAG1/GRA4克隆载体、pCold Ⅲ-SAG1/GRA4原核表达载体、pBluescipt-TK转移载体及重组猫疱疹病毒穿梭质粒pB S-TK-SAG1/GRA4；将pColdⅢ-SAG1/GRA4原核表达载体转化至E.coli BL21感受态细胞,IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物,... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
    1 弓形虫概述
        1.1 弓形虫
        1.2 生活周期
        1.3 弓形虫遗传多样性
        1.4 弓形虫入侵
        1.5 弓形虫病
    2 宿主免疫
    3 弓形虫疫苗研究
        3.1 灭活虫体、抗原或重组抗原
        3.2 减毒活虫体疫苗
        3.3 核酸疫苗
        3.4 活载体疫苗
    4 SAG1蛋白特性
    5 GRA4蛋白特性
    6 猫疱疹病毒1型
    7 研究目的及意义
材料与方法
    1 材料
        1.1 虫种及质粒
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
        1.4 主各种溶液及培养基
    2 方法
        2.1 弓形虫RH的收集
        2.2 引物设计
        2.3 目的基因提取及克隆
        2.4 重组表达质粒的构建及鉴定
        2.5 重组蛋白的表达
        2.6 重组蛋白的纯化
        2.7 多克隆抗体的制备
        2.8 多克隆抗体的间接免疫荧光实验
        2.9 多克隆抗体的Western Blot分析
        2.10 FHV-1转移载体及穿梭质粒的构建及酶切鉴定
        2.11 在293T细胞中重组转移载体的表达
        2.12 表达产物的Western blotting分析
结果
    3 目的基因的扩增及克隆
        3.1 目的基因的扩增
        3.2 原核表达载体的鉴定
        3.3 重组蛋白的表达与纯化
        3.4 间接免疫荧光
        3.5 多克隆抗体的Western Blot分析
        3.6 FHV-1转移载体及穿梭质粒的构建与鉴定
        3.7 Western blot分析表达产物
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
附录(在研期间发表的论文)


【参考文献】：
期刊论文
[1]弓形虫病的研究进展[J]. 刘玲利,崔克.  中国动物保健. 2013(10)
[2]刚地弓形虫免疫逃避相关分子的研究进展[J]. 郑斌,陆绍红.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(05)
[3]弓形虫AMA1蛋白的原核表达载体的构建及体外表达[J]. 王妍,金春梅,崔海鹏,金永军,张厚双,张守发.  安徽农业科学. 2011(29)
[4]Protective effect of DNA-mediated immunization with liposome-encapsulated GRA4 against infection of Toxoplasma gondii[J]. Rui CHEN1,2,Shao-hong LU2,Qun-bo TONG2,Di LOU2,Dong-yan SHI1,Bing-bing JIA1,Guo-ping HUANG1,Jin-fu WANG1(1College of Life Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China) (2Institute of Parasitology,Zhejiang Academy of Medical Science,Hangzhou 310013,China).  Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine,Biochemistry & Biotechnology Journal）. 2009(07)
[5]BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫漂移的实验研究[J]. 李永念,包怀恩.  中国免疫学杂志. 2009(03)
[6]刚地弓形虫感染昆明种及Babl/c小鼠的病理特征研究[J]. 李永念,包怀恩.  中国现代医学杂志. 2009(05)
[7]弓形虫Fukaya株在慢性感染小鼠体内分布的研究[J]. 刘俊燕,杨秀珍,吴增强,杨树森.  中国病原生物学杂志. 2007(03)
[8]弓形虫致密颗粒蛋白4的原核细胞表达与纯化[J]. 林绮萍,吴少庭,翁亚彪,雷明军,潘晖榕,袁仕善,温见翔,秦莉,黄达娜,张仁利,高世同.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2005(06)
[9]弓形虫SAG1可溶性融合蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化[J]. 朱翔,龚唯,张惠琴,陆惠民,黃伟达.  中国寄生虫病防治杂志. 2005(05)
[10]扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病的效果[J]. 司开卫,李哲,程彦斌,贾荣博.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2001(01)

硕士论文
[1]桦褐孔菌多糖对感染不同毒株弓形虫小白鼠AP-1部分信号因子的影响研究[D]. 姚琳.延边大学 2013



本文编号：3253468