表面展示副结核分枝杆菌重组蛋白rMAP62-54c的大肠杆菌载体疫苗的构建及其免疫效果评价

发布时间：2021-06-28 09:18

　　为开发高效表面展示副结核分枝杆菌（Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis,MAP）抗原的大肠杆菌活载体疫苗,本研究将融合的目的基因map0862-2154c克隆于pET-INP载体,构建了重组质粒pET-INP-6254c。将该重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中,IPTG诱导表达后经western blot及流式细胞术等技术检测目的蛋白的表达及定位,western blot分析结果显示,诱导的全菌以及超声后的上清和沉淀在75 ku处均出现目的条带;流式细胞术结果显示,重组蛋白rMAP62-54c能够表达并展示到细胞表面。将110只BABL/c小鼠分为4组:INP-28a/BL21对照组（n=30）和INP-rMAP62-54c/BL21疫苗组（n=30）（均以5×10⁵cfu/只腹腔注射免疫小鼠3次）,PBS对照组（n=30）（注射等体积PBS）,三免后以5×10⁵cfu/只MAP标准株K-10感染上述3组小鼠;空白组（n=20）（不做处理）。然后通过ELISA、流式细胞术等方法定期检测各... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

p ET-INP-6254c质粒的双酶切鉴定

将鉴定正确的重组质粒转化至BL21感受态细胞，经IPTG诱导后进行western blot分析，结果显示，诱导的全菌以及超声后的上清和沉淀在75 ku处均出现目的条带，与预期一致（图2）。表明重组蛋白INP-r MAP62-54c已正确表达，并且部分以可溶形式存在。2.3 流式细胞仪表面展示鉴定结果

以空菌BL21为本底对照，将诱导培养的菌体收集并固定，经抗体孵育后的菌体利用流式细胞仪检测，结果显示，本底对照BL21阳性率为3.94%，而重组菌INP-r MAP62-54c/BL21阳性率为35.4%，因此约有31%的菌体表面展示出重组蛋白（图3）。表明目的蛋白在细胞表面展示效率相对较高。2.4 小鼠血清Ig G抗体水平的检测结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3254045