中华被毛孢的高密度培养及在饲料添加剂的应用

发布时间：2021-07-02 16:10

　　天然冬虫夏草是一种名贵的中药,资源稀缺。为充分开发冬虫夏草的自然资源,本论文对引进的一株冬虫夏草无性型-中华被毛孢（Hirsutella sinensis, EMI-20）开展发酵工艺与利用研究。首先对菌株进行形态与分子鉴定。首先从形态学上初步观察实验菌株EMI-20,并且与刘锡琎、尹小武、何苏琴所描述的形态进行对照,对照东京大学的环境扫描电镜菌丝体观察结果,最终证明与他们所描述的相一致。在分子水平上,实验株的18SrDNA序列与中山大学的相似性高达99%,另外通过ITS的系统发生分析表明：实验菌株EMI-20的序列与NCBI上选取的冬虫夏草和中华被毛孢序列同源性高达90%以上。采用单因素优化、正交优化和液体深层发酵中华被毛孢,以改良的YPD培养基为初始培养基,最终,在深层发酵水平的最佳培养基为：2%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.1%酵母粉、KH2PO40.05%、MgSO4?7H2O0.05%、VB10.01%。利用5L发酵罐,在17℃下培养11d,可获得菌丝体生物量达到19.37g/L。相比较于刘永霞、王灿等人于18℃下的摇瓶培养结果：30d生物量为18.94g/L、16d生物量2.... 

【文章来源】：福建师范大学福建省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中文文摘
目录
绪论
    1 冬虫夏草的概况
        1.1 冬虫夏草的生活史及其生态分布
        1.2 冬虫夏草的研究历史
        1.3 冬虫夏草的功能
        1.4 冬虫夏草无性型研究
    2 冬虫夏草的培养
        2.1 冬虫夏草的人工培养
        2.2 冬虫夏草的半人工培养
        2.3 无性型的培养
    3 中草药或中华被毛孢于南美白对虾养殖技术的应用
        3.1 中草作为南美白对虾的饲料添加剂的现状
        3.2 对虾免疫和解毒机能的指标
    4 研究的目的与意义
第一章 冬虫夏草无性型的鉴定
    1.1 引言
    1.2 实验材料和试剂
        1.2.1 实验材料
        1.2.2 实验试剂
        1.2.3 实验仪器
        1.2.4 主要培养基和溶液
    1.3 实验方法
        1.3.1 菌丝体形态学的观察
        1.3.2 电子显微镜观察菌丝体
        1.3.3 基因组DNA提取
        1.3.4 基因组DNA琼脂糖凝胶电泳分析
        1.3.5 18S、ITS序列扩增
        1.3.6 18S、ITS序列扩增琼脂糖凝胶电泳分析
        1.3.7 胶回收参照胶回收试剂盒
        1.3.8 序列测定与系统发生分析
    1.4 实验结果
        1.4.1 中华被毛孢形态学观察
        1.4.2 中华被毛孢菌丝显微结构观察
        1.4.3 中华被毛孢菌丝环境扫描电子显微镜观察
        1.4.5 中华被毛孢EMI-20总基因组DNA的提取
        1.4.6 中华被毛孢EMI-20的18S、ITS基因的PCR扩增
        1.4.7 中华被毛孢EMI-20的ITS系统发生分析
    1.5 小结
第二章 中华被毛孢的液体培养
    2.1 引言
    2.2 实验材料与试剂
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 主要培养基和溶液
    2.3 实验方法
        2.3.1 菌种的活化
        2.3.2 摇瓶单因素实验优化
        2.3.3 摇瓶正交实验优化
        2.3.4 温度、装液量对中华被毛孢的生长特性的研究
        2.3.5 摇瓶生长特性的研究
        2.3.6 液体深层发酵放大培养
        2.3.7 生物量的测定
        2.3.8 发酵液中的葡萄糖含量的测定
    2.4 实验结果
        2.4.1 单因素实验优化
        2.4.2 正交实验优化
        2.4.3 沮度、装液量的优化
        2.4.4 中华被毛孢生长特性研究
        2.4.5 中华被毛孢液体深层发酵培养
    2.5 小结
第三章 中华被毛孢作为饲料添加剂在南美白对虾养殖中的应用
    3.1 引言
    3.2 实验材料与试剂
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验饲料与添加剂
        3.2.3 实验分组以及饲养管理
        3.2.4 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 南美白对虾的生长指标的测定
        3.3.2 南美白对虾的免疫以及解毒代谢指标的测定
    3.4 实验结果
        3.4.1 南美白对虾的生长指标
        3.4.2 南美白对虫下的生长指标
        3.4.3 南美白对虾的免疫指标
        3.4.4.解毒代谢指标的测定
    3.5 小结
        3.5.1 中华被毛孢添加剂对南美白对虾生长指标的影响
        3.5.2 中华被毛孢添加剂对南美白对虾免疫力的影响
        3.5.3 中华被毛孢添加剂对南美白对虾解毒代谢酶的影响
第四章 结论与展望
参考文献
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]冬虫夏草和中国被毛孢形态学再研究[J]. 何苏琴,王三喜,罗进仓,李风庆,金秀琳,文朝慧,马福全,周昭旭,唐德志.  微生物学通报. 2011(11)
[2]日粮中添加酶解小麦蛋白对南美白对虾生长及非特异性免疫功能的影响[J]. 许合金,冯幼,王修启,张子峰.  华南农业大学学报. 2011(04)
[3]冬虫夏草研究概述[J]. 谭少君,刘鹏鹏,王金主,徐军庆,高艳华,李峰,袁建国.  山东食品发酵. 2010(03)
[4]乳酸菌对南美白对虾生长、饲料利用和体组成的影响[J]. 王国霞,黄燕华,黄文庆,周晔,严琴,董尚智.  中国饲料. 2010(12)
[5]冬虫夏草无性型—中国被毛孢固态发酵条件的初步研究[J]. 葛飞,桂琳,李春如,樊美珍.  生物学杂志. 2009(03)
[6]冬虫夏草菌液体发酵培养试验初报[J]. 张忠广,乔正强,柳慧玲,吴雪莲.  食用菌. 2006(S1)
[7]复方马齿苋影响南美白对虾非特异性免疫功能研究[J]. 覃振林,韦海英,李学坚,曾地刚,雷爱莹.  水利渔业. 2006(05)
[8]冬虫夏草研究的回顾与展望[J]. 古德祥,张古忍,王江海,刘昕.  中国食品学报. 2006(02)
[9]我国冬虫夏草及其资源保护、开发利用对策[J]. 胡清秀,寥超子,王欣.  中国农业资源与区划. 2005(05)
[10]冬虫夏草无性型的分离培养和菌丝显微结构的观察[J]. 刘彦威,苏敬良,韩博,赵德明,田向荣,田绍进.  黑龙江畜牧兽医. 2005(10)

博士论文
[1]冬虫夏草无性型培养与鉴定及其抗肿瘤机制的研究[D]. 刘彦威.中国农业大学 2005

硕士论文
[1]冬虫夏草无性型的鉴定和生长特性研究[D]. 尹小武.上海交通大学 2009
[2]中华绒螯蟹及中国对虾几种生化指标变化的研究[D]. 苏建国.西北农林科技大学 2001



本文编号：3260789