枯草芽孢杆菌胞外囊泡的分离及其对巨噬细胞免疫功能的影响
发布时间：2021-07-04 01:46
细菌胞外囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）是在细菌生长过程中从细胞膜分泌到细胞外空间的具有脂质双层结构的纳米级囊泡,它含有细菌细胞膜蛋白,脂质和核酸等多种生物活性分子,在细胞间传递信号,具有多种生理功能。如:介导细菌-宿主相互作用,呈递细菌抗原,调节宿主免疫系统功能。随着对OMV生物学特性和功能研究的不断深入,一些共生细菌和益生菌是否能通过分泌OMVs途径诱导宿主免疫系统的发育已引起学术界的广泛关注。本试验分离纯化枯草芽孢杆菌168菌株（B.subtilis 168）细胞外囊泡,以小鼠巨噬细胞为模型,研究B.subtilis 168细胞外囊泡（BS-OMV）对巨噬细胞活力的影响。并且构建绿色荧光蛋白重组B subtilis 168,检测细胞外囊泡携带重组蛋白的能力。主要试验结果如下:（1）首先采用差速离心法从B.subtilis 168培养液上清中富集BS-OMVs,随后采用密度梯度离心法进行纯化得到纯化BS-OMVs。扫描电镜检测结果显示:BS-OMVs的形态大小不一,视野清晰且无杂质,呈圆形或椭圆形,直径平均约为100 nm左右,范围在50-200 n...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
扫igure1-1Ob扫描电镜下细servationofB细菌胞外囊泡BS-OMVsus形态
图 2-2 B. subtilis 168 的生长曲线Fig. 2-2 Growth curve of B. subtilis 168态检测及粒径分析法从 B. subtilis 168 培养液上清中富集、经过密度梯密度层 BS-OMVs 的浓度，计算各层 BS-OMVs 相图2-3)显示BS-OMVs主要集中在F3-F5，所以选择离心富集得到纯化的 BS-OMVs。
采用差速离心法从 B. subtilis 168 培养液上清中富集、经过密度梯度离心后采用纳米颗粒粒度仪测定各密度层 BS-OMVs 的浓度，计算各层 BS-OMVs 相对丰度，选取合适的浓度区间，结果(图2-3)显示BS-OMVs主要集中在F3-F5，所以选择浓度梯度在20%-30%的密度层进行超速离心富集得到纯化的 BS-OMVs。图 2-3 梯度密度离心法各密度层中 BS-OMVs 相对丰度F1-F10 分别是 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%不同浓度梯度的 OptiPrepTM Density Gradient Medium 溶液。Fig. 2-3 Relative abundance of BS-OMV in different dsensity layerNote: F1-F10 are 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌对肉仔鸡生长性能、肠道形态和菌群数量的影响[J]. 齐博,武书庚,王晶,齐广海,张海军,阎桂玲,王旭,董延. 动物营养学报. 2016(06)
[2]羊种布氏杆菌NN1202和LA1105株UgpB蛋白B细胞抗原表位分析[J]. 周庆安,李军,潘艳,陈泽祥,杨威,许力干. 黑龙江畜牧兽医. 2015(05)
[3]微生态制剂应用研究概况[J]. 李春慧,蒲万霞,吴润,苏洋. 动物医学进展. 2013(11)
[4]动物肠道菌群结构分析方法进展[J]. 周雪雁,刘翊中,陈轶霞,李倬,冯玉萍,杨具田. 微生物学杂志. 2013(05)
[5]枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响[J]. 徐文彦,郭国军,唐国盘,齐子鑫. 湖北农业科学. 2013(10)
[6]产植酸酶枯草芽孢杆菌诱变选育方法的研究[J]. 鲍振国,孙新文,张彪,张文举. 饲料研究. 2013(04)
[7]饲料中添加枯草芽孢杆菌对青鱼生长、消化酶活性和鱼体组成的影响[J]. 沈斌乾,陈建明,郭建林,潘茜,孙丽慧,叶金云. 水生生物学报. 2013(01)
[8]新生仔猪口服屎肠球菌对其肠道菌群组成及化学屏障的影响[J]. 黄怡,黄琴,崔志文,李卫芬,余东游. 中国兽医学报. 2012(07)
[9]枯草芽孢杆菌产酶规律及酶学性质研究[J]. 高永生,朱丽云,朱贵州,费瑶,章宇星. 安徽农业科学. 2011(19)
[10]反刍动物微生态制剂的研究进展[J]. 李冬野,吴凌. 黑龙江八一农垦大学学报. 2011(01)
博士论文
[1]芽孢杆菌制剂对大肠杆菌感染仔猪免疫应答及肠道菌群影响[D]. 任继平.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]枯草芽孢杆菌和酵母细胞壁多糖对哺乳和断奶仔猪生产性能的影响研究[D]. 李兴华.广西大学 2013
本文编号：3263775
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
扫igure1-1Ob扫描电镜下细servationofB细菌胞外囊泡BS-OMVsus形态
图 2-2 B. subtilis 168 的生长曲线Fig. 2-2 Growth curve of B. subtilis 168态检测及粒径分析法从 B. subtilis 168 培养液上清中富集、经过密度梯密度层 BS-OMVs 的浓度，计算各层 BS-OMVs 相图2-3)显示BS-OMVs主要集中在F3-F5，所以选择离心富集得到纯化的 BS-OMVs。
采用差速离心法从 B. subtilis 168 培养液上清中富集、经过密度梯度离心后采用纳米颗粒粒度仪测定各密度层 BS-OMVs 的浓度，计算各层 BS-OMVs 相对丰度，选取合适的浓度区间，结果(图2-3)显示BS-OMVs主要集中在F3-F5，所以选择浓度梯度在20%-30%的密度层进行超速离心富集得到纯化的 BS-OMVs。图 2-3 梯度密度离心法各密度层中 BS-OMVs 相对丰度F1-F10 分别是 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%不同浓度梯度的 OptiPrepTM Density Gradient Medium 溶液。Fig. 2-3 Relative abundance of BS-OMV in different dsensity layerNote: F1-F10 are 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌对肉仔鸡生长性能、肠道形态和菌群数量的影响[J]. 齐博,武书庚,王晶,齐广海,张海军,阎桂玲,王旭,董延. 动物营养学报. 2016(06)
[2]羊种布氏杆菌NN1202和LA1105株UgpB蛋白B细胞抗原表位分析[J]. 周庆安,李军,潘艳,陈泽祥,杨威,许力干. 黑龙江畜牧兽医. 2015(05)
[3]微生态制剂应用研究概况[J]. 李春慧,蒲万霞,吴润,苏洋. 动物医学进展. 2013(11)
[4]动物肠道菌群结构分析方法进展[J]. 周雪雁,刘翊中,陈轶霞,李倬,冯玉萍,杨具田. 微生物学杂志. 2013(05)
[5]枯草芽孢杆菌对黄河鲤鱼生产性能及消化酶活性的影响[J]. 徐文彦,郭国军,唐国盘,齐子鑫. 湖北农业科学. 2013(10)
[6]产植酸酶枯草芽孢杆菌诱变选育方法的研究[J]. 鲍振国,孙新文,张彪,张文举. 饲料研究. 2013(04)
[7]饲料中添加枯草芽孢杆菌对青鱼生长、消化酶活性和鱼体组成的影响[J]. 沈斌乾,陈建明,郭建林,潘茜,孙丽慧,叶金云. 水生生物学报. 2013(01)
[8]新生仔猪口服屎肠球菌对其肠道菌群组成及化学屏障的影响[J]. 黄怡,黄琴,崔志文,李卫芬,余东游. 中国兽医学报. 2012(07)
[9]枯草芽孢杆菌产酶规律及酶学性质研究[J]. 高永生,朱丽云,朱贵州,费瑶,章宇星. 安徽农业科学. 2011(19)
[10]反刍动物微生态制剂的研究进展[J]. 李冬野,吴凌. 黑龙江八一农垦大学学报. 2011(01)
博士论文
[1]芽孢杆菌制剂对大肠杆菌感染仔猪免疫应答及肠道菌群影响[D]. 任继平.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]枯草芽孢杆菌和酵母细胞壁多糖对哺乳和断奶仔猪生产性能的影响研究[D]. 李兴华.广西大学 2013
本文编号：3263775
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