鸡prdm1表达和功能的相关研究

发布时间：2021-07-04 18:59

　　PRDM1（positive regulatory domain1）是一个具有典型正性调控结构域和锌指结构的转录因子,已经在许多物种中得到鉴定,并且在细胞生长、分化,胚胎发育中有重要影响。此外,PRDM1是小鼠生殖细胞特化的关键因子。然而,鸟类胚胎发育中PRDM1的表达模式和功能还没有充分研究,鸟类生殖细胞的起源也尚未定论。因此,我们研究鸡发育过程中各个组织尤其是生殖系中PRDM1的时空表达,并研究其过表达对鸡胚发育和DF-1细胞细胞周期的影响。我们的结果表明prdm1mRNA表达于鸡的胚盘细胞和各个组织,包括：肝、皮、肺、肾、眼、法氏囊、脾脏、腺胃、肌胃、肠、睾丸、卵巢、舌、羽毛和胸腺。但是在大脑,心脏,骨骼肌中几乎检测不至\\prdml mRNA的表达。在所有检测的组织中,第X期的胚盘细胞中prdml mRNA的表达水平最高。许多组织的发育过程中prdm1mRNA的表达水平有显著变化,比如胚盘、法氏囊、脾、羽毛和生殖系。此外,Western blot和免疫组织化学检测PRDM1蛋白的表达结果基本一致,并且和mRNA结果类似,肌胃除外。免疫组化检测结果显示PRDM1位于平滑肌中。另外... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
缩略词
第一章 引言
    1.1 PRDM1基因简介
        1.1.1 PRDM1基因的结构
        1.1.2 PRDM1基因的表达与功能
        1.1.3 PRDM1作用的分子机制
        1.1.4 鸡PRDM1简介
    1.2 鸟类发育生物学
        1.2.1 鸡卵子的发育
        1.2.2 鸡胚胎的早期发育
        1.2.3 鸡生殖细胞系的发育
    1.3 鸡胚的遗传操作
        1.3.1 逆转录病毒载体法
        1.3.2 慢病毒载体法
    1.4 DF-1细胞系简介
    1.5 本研究的目的和意义
第二章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物及种蛋
        2.1.2 主要实验仪器
        2.1.3 试剂及耗材
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 方法
        2.2.1 样本采集
        2.2.2 总RNA的提取和反转录
        2.2.3 RT-PCR
        2.2.4 实时荧光定量RT-PCR
        2.2.5 Western blot
        2.2.6 免疫组化
        2.2.7 免疫荧光
        2.2.8 PAS染色
        2.2.9 Prdm1基因的克隆
        2.2.10 慢病毒表达载体的构建
        2.2.11 慢病毒包装及滴度检测
        2.2.12 微注射玻璃针的准备
        2.2.13 显微注射慢病毒载体
        2.2.14 组织DNA的提取
        2.2.15 表达载体pEGFP-N1-PRDM1的构建
        2.2.16 细胞培养
        2.2.17 脂质体法转染细胞
        2.2.18 统计
        2.2.19 引物列表
第三章 PRDM1在鸡胚和生殖细胞系发育中的表达
    3.1 背景
    3.2 实验结果
        3.2.1 胚盘/胚胎和各组织中prdml mRNA的检测
        3.2.2 Prdm1 mRNA的定量分析
        3.2.3 不同组织中PRDM1蛋白的表达与定位
        3.2.4 PRDM1是性腺中生殖细胞和血液PGCs的标志
        3.2.5 胚盘细胞中PRDM1蛋白的定位
    3.3 讨论
第四章 PRDM1过表达对鸡胚发育的影响
    4.1 背景
    4.2 实验结果
        4.2.1 慢病毒表达载体GV208-PRDM1的构建
        4.2.2 显微注射慢病毒载体后胚胎存活率和出雏率统计结果
        4.2.3 显微注射慢病毒表达载体后鸡胚各组织中荧光检测
        4.2.4 显微注射慢病毒表达载体后鸡胚中外源性prdm1的DNA检测
        4.2.5 显微注射慢病毒表达载体后鸡胚中外源性prdm1 mRNA的检测
    4.3 讨论
第五章 DF-1细胞中PRDM1过表达诱导G0/G1期停滞
    5.1 背景
    5.2 实验结果
        5.2.1 pEGFP-N1-PRDM1表达载体的构建
        5.2.2 PRDM1定位于DF-1细胞的细胞核
        5.2.3 DF-1细胞中prdm1的过表达
        5.2.4 PRDM1过表达导致细胞周期G0/G1期停滞
        5.2.5 p53及p53相关基因的表达
        5.2.6 Rb通路相关基因的表达
        5.2.7 细胞周期蛋白基因的表达
        5.2.8 PRDM1过表达抑制DF-1增殖并改变细胞形态
    5.3 讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
附录
    Prdm1 cDNA序列
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]雏鸡品质影响的因素及雏鸡出壳的注意事项[J]. 娄艳.  养殖技术顾问. 2013(12)
[2]基因沉默的研究进展[J]. 陈雪梅,杜显刚,谭志巍,王亚琴,官鹏.  法律与医学杂志. 2005(03)
[3]在代用蛋壳中孵化鸡胚[J]. 李赞东,杜国清,周顺伍,齐顺章.  畜牧兽医学报. 1994(06)



本文编号：3265355